攜帶綠色熒光蛋白基因的慢病毒載體轉染幾種皮膚結構重要細胞的實驗研究.pdf

1、目的：本實驗選取皮膚結構中幾種常見細胞為研究對象，用慢病毒載體轉染這些細胞，以探究慢病毒載體合適的轉染條件、轉染效率及轉染對細胞活力的影響等問題。 方法：培養(yǎng)3種細胞：成纖維細胞、脂肪前體細胞、血管內(nèi)皮細胞，分3部分進行實驗。1)用MOI(感染復數(shù))=10，20，50，100的LV-eGFP(攜帶綠色熒光蛋白基因的慢病毒載體)轉染上述細胞；轉染后1周內(nèi)于熒光顯微鏡下觀察GFP表達情況，從而判斷慢病毒載體轉染目的細胞所需的合適MO

2、I值及GFP表達時間等；此外，還比較了加polybrene組與不加polybrene組之間GFP表達的差異；2)在確定了LV載體轉染目的細胞合適的MOI值后，以此條件進行目的細胞轉染，在轉染后不同時間，通過FACS(熒光激活細胞分選術)檢測轉染效率；3)設置轉染組及對照組，分別以MTT(甲基噻唑基四唑)法及臺盼藍染色活細胞計數(shù)法來檢測慢病毒載體轉染后兩組之間細胞活力的差別，以探討慢病毒載體轉染對目的細胞活力的影響。 結果：1)熒

3、光顯微鏡觀察結果：a)對于實驗中的3種細胞，GFP表達隨MOI值的增大而變強。其中MOI=20時GFP表達已比較滿意。b)總體上，LV-eGFP轉染細胞4天后GFP表達已接近高峰。c)加polybrene組GFP表達要好于未加polybrene組，對于脂肪前體細胞和血管內(nèi)皮細胞尤為明顯。2)FACS檢測結果：轉染后4天，3種細胞的轉染效率都在50％以上，1周時效率較4天時變化不大，3周時轉染效率仍比較高。3)MTT法、臺盼藍染色細胞計數(shù)