中國(guó)華南Prader-Willi綜合征患兒臨床及分子特征研究.pdf

1、背景：
　　Prader-Willi綜合征(Prader-Willisyndrome，PWS)是最早被證實(shí)涉及基因組印記的遺傳性疾病，發(fā)病率1/10000-1/30000，平均死亡率3％。目前已經(jīng)明確PWS發(fā)病機(jī)制包括染色體15q11-13父源染色體缺失、母源同源二倍體、印記中心微缺失及突變、甲基化異常等。不同地區(qū)PWS患兒臨床及分子分型特征存在差異，不同分子類型的PWS患兒其父母再生育PWS患兒的風(fēng)險(xiǎn)不同，但目前針對(duì)我國(guó)華南地區(qū)

2、PWS患兒臨床及分子分型特征的研究尚不多，缺乏大樣本的研究報(bào)道?；谏鲜霰尘埃狙芯柯?lián)用甲基化特異性聚合酶鏈反應(yīng)（MS-PCR）、微陣列比較基因組雜交(aCGH)、甲基化特異性多重連接探針擴(kuò)增（MS-MLPA)、微衛(wèi)星分析等技術(shù)，研究中國(guó)華南PWS患兒分子特征及患兒的臨床特征，為中國(guó)華南PWS患兒的早期診斷、早期治療、遺傳咨詢和產(chǎn)前診斷提供基礎(chǔ)和依據(jù)，具有一定的創(chuàng)新性和臨床應(yīng)用價(jià)值。
　　目的：
　　1.探索中國(guó)華南Prad

3、er-Willi綜合征患兒的臨床特征，為早期臨床篩查和進(jìn)一步行分子診斷確診提供線索和依據(jù)。
　　2.探索中國(guó)華南Prader-Willi綜合征患兒的分子特征，為早期分子分型診斷、遺傳咨詢和產(chǎn)前診斷提供參考和依據(jù)。
　　研究對(duì)象和研究方法：
　　1.研究2012年11月到2015年12月到廣州市婦女兒童醫(yī)療中心就診的PWS患兒、精神運(yùn)動(dòng)發(fā)育遲緩對(duì)照、正常對(duì)照共153例，男70例，女81例。其中，正常對(duì)照24例；不明原因精

4、神運(yùn)動(dòng)發(fā)育遲緩對(duì)照58例；aCGH、MS-MLPA及MS-PCR聯(lián)合確診的PWS陽(yáng)性對(duì)照2例；臨床疑似PWS患兒69例。
　　2.提取受試者外周血基因組DNA，分別應(yīng)用MS-PCR、MS-MLPA及aCGH方法進(jìn)行基因分析，根據(jù)aCGH檢查染色體變異定位查詢數(shù)據(jù)庫(kù)DECIPHER將缺失型病例分為DelI(缺失I型)和DelⅡ（缺失Ⅱ型)。
　　3.計(jì)量資料以中位數(shù)平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，計(jì)數(shù)單位以百分比表示，應(yīng)用SPSS13．0

5、軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，應(yīng)用卡方檢驗(yàn)對(duì)兩種方法學(xué)和兩組試驗(yàn)間進(jìn)行比較。
　　結(jié)果：
　　1.對(duì)69例PWS疑似患兒行MS-PCR中有40例確診為PWS，29例結(jié)果不支持PWS。PWS患兒中29例行MS-PCR、MS-MLPA和aCGH檢查，11例僅行MS-PCR和/或MS-MLPA。29例PWS患兒的aCGH結(jié)果中，24例PWASCR區(qū)域拷貝數(shù)為缺失型（82.8%），其中7例缺失I型，16例缺失Ⅱ型，1例為非典型缺失；3例

6、15號(hào)染色體雜合性缺失（LOH）；2例拷貝數(shù)正常。對(duì)上述3例LOH行STR示2例為母源單親同二倍體，1例母源部分單親同二倍體；aCGH拷貝數(shù)檢測(cè)正常的2例進(jìn)行STR示均為母源單親異二倍體。對(duì)29例MS-PCR陰性的PWS疑似患兒行aCGH檢測(cè)示3例PWASCR重復(fù)，26例無(wú)PWASCR區(qū)域拷貝數(shù)異常。
　　2.29例PWS患兒的aCGH結(jié)果中，23例存在14q32.33區(qū)域的拷貝數(shù)重復(fù)；58例不明原因的精神運(yùn)動(dòng)發(fā)育遲緩患兒的aCG

7、H結(jié)果中，30例14q32.33區(qū)域的拷貝數(shù)重復(fù)；24例生長(zhǎng)發(fā)育正常兒童的aCGH結(jié)果中，5例14q32.33區(qū)域的拷貝數(shù)重復(fù)。PWS患兒與不明原因精神運(yùn)動(dòng)發(fā)育遲緩患兒14q32.33區(qū)域的拷貝數(shù)重復(fù)比較（P=0.013<0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；PWS患兒與正常生長(zhǎng)發(fā)育兒童14q32.33區(qū)域的拷貝數(shù)重復(fù)比較（P=0.00<0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；不明原因精神運(yùn)動(dòng)發(fā)育遲緩患兒與正常生長(zhǎng)發(fā)育兒童14q32.33區(qū)域的拷貝數(shù)重復(fù)

8、比較（P=0.10>0.05），差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3.對(duì)40例確診為PWS患兒的臨床特征進(jìn)行分析，確診年齡在5d至16歲之間；男23例（57.5%），女17例（42.5%）。所有的患兒都有新生兒肌張力低下、嬰兒期喂養(yǎng)困難和哭聲微弱（40例，100%）。37例（92.5%）性腺發(fā)育不良，23例男性患兒中的22例患兒有單側(cè)或雙側(cè)隱睪（占男性95.7%），14例男性患兒曾行隱睪手術(shù)（占男性60.9%）。皮膚色素減退33例（82.5

9、%），特殊面容30例（75%），26例手足短小(65%)，6例有癲癇（15%）。26例1歲以上患兒中，均出現(xiàn)不同程度的精神運(yùn)動(dòng)發(fā)育遲緩（100%），24例語(yǔ)言清晰度異常（92.3%），所有患兒均有認(rèn)知行為異常（100%），23例（88.5%）在1-6歲之間開(kāi)始食欲旺盛、體重增長(zhǎng)過(guò)快，21例（80.8%）肥胖癥；12例矮小癥（46.2%）；22例（84.6%）睡眠紊亂，18例（69.2%）有腺樣體肥大或扁桃體肥大，13例（50%）很少或不

10、發(fā)生嘔吐，15例（57.5%）痛閾較高，10例（38.5%）皮膚自我損傷，9例（34.6%）斜視；11例存在胰島素抵抗（42.3%），4例（15.4%）患有2型糖尿病。
　　結(jié)論：
　　1.在本組研究對(duì)象中，中國(guó)華南PWS患兒缺失型占82.8%，二倍體占17.2%。
　　2.aCGH能準(zhǔn)確檢測(cè)PWASCR區(qū)域拷貝數(shù)的異常，可診斷出缺失型和母源單親同二倍體，缺失型可以區(qū)分缺失I和缺失Ⅱ，并能明確缺失片段大小。能診斷出15

11、q11.2-q13.1區(qū)域非典型缺失及重復(fù)，但不能診斷單親異二倍體。
　　3.PWS患兒出現(xiàn)14q32.33拷貝數(shù)重復(fù)的多態(tài)性改變與正常人及不明原因的精神運(yùn)動(dòng)發(fā)育遲緩的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，不明原因的精神運(yùn)動(dòng)發(fā)育遲緩患兒出現(xiàn)14q32.33拷貝數(shù)重復(fù)的多態(tài)性改變與正常人差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示14q32.33拷貝數(shù)重復(fù)的多態(tài)性改變可能影響染色體15q11.2-q13.1區(qū)域結(jié)構(gòu)或功能的變異。
　　4.嬰幼兒期肌張力低下、哭聲微弱及