Prader-Willi綜合征（PWS）甲基化特異性PCR（MS-PCR）診斷方法的建立及臨床表現(xiàn)、內(nèi)分泌異常的初步探討.pdf

1、目的：PWS是父源15q11-13區(qū)域的印記基因缺陷所導(dǎo)致的復(fù)雜的多系統(tǒng)異常。以新生兒肌張力低、發(fā)育延遲、身材矮小、行為異常、童年時(shí)期開(kāi)始肥胖、下丘腦性性腺發(fā)育不良及長(zhǎng)顱、窄臉、杏仁眼、小嘴、薄上唇、嘴角向下的特征性外貌為臨床表現(xiàn)。主要的遺傳類(lèi)型包括父源15q11-13區(qū)域微缺失、母源同源二倍體、印記基因缺陷等。MSPCR是一種快速、高效，并且特異性和敏感性均佳的分子診斷方法，可診斷絕大多數(shù)PWS臨床病例。本研究旨在建立穩(wěn)定的MSPCR

2、診斷PWS的方法，并對(duì)確診患者進(jìn)行生長(zhǎng)發(fā)育情況、生化指標(biāo)及相關(guān)內(nèi)分泌功能的初步評(píng)估。 方法： 1、對(duì)符合臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)的6例PWS患者取外周血，采用鹽析法自全血中提取DNA，利用CpGemone<'TM>Fast Modification試劑盒行亞硫酸鹽修飾，對(duì)修飾產(chǎn)物行聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)，擴(kuò)增產(chǎn)物行瓊脂糖電泳。以正常人DNA作為對(duì)照。 2、對(duì)臨床符合，并且MSPCR方法證實(shí)的5例患者進(jìn)行身高、體重、生化指標(biāo)測(cè)

3、量，行生長(zhǎng)激素水平、性腺機(jī)能、腎上腺皮質(zhì)機(jī)能、甲狀腺機(jī)能評(píng)估。行OGTT試驗(yàn)。以年齡匹配的(2到19歲)10例正常人為對(duì)照。 結(jié)果： 1、 6例患者，男女各3例，就診年齡1歲11月到17歲。6例患者均存在新生兒期及嬰兒期肌張力減低、喂養(yǎng)困難，1到5歲開(kāi)始攝食過(guò)度，逐漸出現(xiàn)肥胖。3例患者存在性腺機(jī)能減退。正常對(duì)照組顯示出父源及母源兩條條帶，而6例臨床診斷PWS患者均僅顯示一條母源條帶，與臨床診斷符合率100％。 2

4、、 5例MSPCR方法證實(shí)的患者，男3例，女2例，評(píng)估年齡2歲到19歲。其生長(zhǎng)發(fā)育情況、生化指標(biāo)及相關(guān)內(nèi)分泌功能初步評(píng)估：5例患者均存在肥胖(BMI 29.24±9.30kg/m<'2>g/m<'2>)，2例存在身材矮小(小于同齡人兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差)；2例甘油三脂(TG)升高(2.35～3.54mmol/L)，1例血ApoB升高(1.1g/l)，4例超敏感C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)升高(4.2l～>10mg/L)，1例患者出現(xiàn)肝功能損傷(AL

5、T126U/L)，5例患者均無(wú)明顯腎功能損傷表現(xiàn)，PWS患者組與正常對(duì)照組比較，hs-CRP、CHO、LDL-C、ApoB、ALT存在顯著差異(P<0.05)。行生長(zhǎng)激素刺激試驗(yàn)的4例患者均存在生長(zhǎng)激素缺乏(GHmax 2.974±2.966ng/m1)；行性激素檢查的3例患者1例成人患者存在激素基礎(chǔ)水平異常(睪酮(T)1.7nmol/L)；行尿游離皮質(zhì)醇檢查的4例患者均正常(18.003±3.3273tug/24h)；行甲狀腺功能檢查

6、的4例患者，1例甲狀腺功能輕度異常(促甲狀腺素(TSH)5.591ultIU/ml，總T3(TT3)2.23ng/ml)。PWS患者組與正常對(duì)照組比較，無(wú)顯著差異(P<0.05)；行OGTT檢查的4例患者2例診斷糖尿病，1例診斷糖耐量異常(IGT). 結(jié)論： 1、 MSPCR可以快速、高效的對(duì)可疑PWS患者做出診斷，具有很好的特異性和敏感性，可在臨床推廣應(yīng)用。 2、本組PWS患者中，多表現(xiàn)為身材矮小、體態(tài)肥胖，存