ID4基因甲基化特異性定量PCR方法的建立及其在急性白血病微小殘存病檢測(cè)中的意義.pdf

1、軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院解放軍總醫(yī)院碩士學(xué)位論文ID4基因甲基化特異性定量PCR方法的建立及其在急性白血病微小殘存病檢測(cè)中的意義姓名：劉洋申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：血液內(nèi)科指導(dǎo)教師：于力20090520軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院碩士學(xué)位論文陰性以及空白對(duì)照；成功構(gòu)建了目標(biāo)片段和內(nèi)參擴(kuò)增片段的質(zhì)粒；制作目標(biāo)片段和內(nèi)參的標(biāo)準(zhǔn)曲線；選擇適合的定量分析方法。并驗(yàn)證該方法的特異性和敏感性，結(jié)果證明：l、17例正常骨髓ID4甲基化均為陰性，45例初治急性白血病骨髓樣本甲基化陽(yáng)

2、性率為778％，其中AML為727％，ALL為792％，方法具有良好的特異性。2、將甲基化陰性和陽(yáng)性細(xì)胞系按不同比例混合，該方法最低可以檢測(cè)到1：105中的ID4甲基化陽(yáng)性細(xì)胞，證明敏感性高。第三，在方法建立的基礎(chǔ)上，初步嘗試檢測(cè)急性白血病骨髓樣本：1、甲基化陽(yáng)性率中，正常骨髓標(biāo)本均為0，初治組為75％，復(fù)發(fā)、未緩解組為100％。結(jié)果提示：在急性白血病細(xì)胞中耐藥、難治的克隆甲基化陽(yáng)性率高；易復(fù)發(fā)、難治的亞型甲基化陽(yáng)性率呈增高的趨勢(shì)。2、

3、PMR(percentageofmethylatedreference)值代表甲基化定量水平，正常組均為0與忠病組有顯著差異(p0oo)；在不同疾病狀態(tài)下(初治、完全緩解、復(fù)發(fā)、未緩解)初治組與完全緩解組PMR值有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p=0031005)。PMR值似乎與腫瘤在體內(nèi)的負(fù)荷有關(guān)。初治時(shí)個(gè)體間PMR值差異較大。3、系列樣本的研究發(fā)現(xiàn)：持續(xù)緩解狀態(tài)時(shí)，PMR值一直保持在極低的水平；復(fù)發(fā)時(shí)PMR伴隨腫瘤細(xì)胞數(shù)量增加而增加，PMR值與急性白

4、血病腫瘤負(fù)荷有顯著的相關(guān)性；有提前預(yù)測(cè)形態(tài)學(xué)復(fù)發(fā)的可能；與其他遺傳學(xué)微殘指標(biāo)變化趨勢(shì)相同，可檢測(cè)到急性白血病分子復(fù)發(fā)。總之，本研究成功建立了ID4甲基化特異性定量PCR的體系和方法。同時(shí)通過(guò)臨床樣本證明：ID4基因啟動(dòng)子區(qū)的甲基化在各急性白血病亞型中具有覆蓋率廣；該方法特異性好，敏感性高；甲基化水平的量化指標(biāo)PMR值，可以反映急性白血病患者腫瘤細(xì)胞負(fù)荷變化；不同克隆的白血病細(xì)胞間存在差異；動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)具有提示復(fù)發(fā)的作用，具備成為新的MRD檢