基于TRPs通道探討當(dāng)歸四逆湯對奧沙利鉑神經(jīng)毒性機(jī)制的研究.pdf

1、目的：在中醫(yī)理論指導(dǎo)下，在前期臨床及實驗工作基礎(chǔ)上，研究溫陽通脈經(jīng)方當(dāng)歸四逆湯防治奧沙利鉑神經(jīng)毒性（Oxaliplatin-induced neurotoxicity，OXIN）的作用機(jī)理。
　　方法：結(jié)合目前研究較為成熟的與OXIN相關(guān)的瞬時感受器電位(transient receptor potentialTRP)離子通道的亞型，從慢性O(shè)XIN模型大鼠疼痛行為學(xué)變化、背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞病理學(xué)改變、細(xì)胞功能角度及基因mRNA、蛋白質(zhì)

2、表達(dá)水平研究當(dāng)歸四逆湯防治OXIN的作用機(jī)理。實驗內(nèi)容:
　　1、造模，行大鼠行為學(xué)測定，尼氏染色觀察大鼠背根神經(jīng)節(jié)一般病理變化，光鏡下測量核仁大小。
　　2、RT-PCR、Western-blot觀察應(yīng)用OXA及高、中、低劑量當(dāng)歸四逆湯后大鼠DRG TRPs（TRPV1、TRPA1、TRPM8）通道基因水平及蛋白表達(dá)的變化。
　　3、鈣成像方法觀察應(yīng)用OXA及高、中、低劑量當(dāng)歸四逆湯后TRPs(TRPV1、TRPA1

3、、TRPM8)通道活性的變化。
　　結(jié)果：
　　1.通過大鼠行為學(xué)測定和組織病理學(xué)觀察證實慢性O(shè)XIN模型制備成功。D29，與空白組相比，模型組、當(dāng)歸四逆湯低、中劑量組出現(xiàn)機(jī)械疼痛閾值的下降(p＜0.05)，而當(dāng)歸四逆湯高劑量組未出現(xiàn)明顯的下降(p＞0.05)。光鏡觀察可見與空白組相比，應(yīng)用OXA后其余各組DRG細(xì)胞核仁體積縮小(p＜0.05)，而當(dāng)歸四逆湯高、中、低劑量組與模型組相比，核仁體積縮小的程度較輕(p＜0.05)

4、。
　　2.WB顯示:與空白組相比，應(yīng)用OXA后各組大鼠DRG細(xì)胞TRPV1、TRPA1、TRPM8表達(dá)量增加，與模型組相比，應(yīng)用當(dāng)歸四逆湯后低劑量組可降低TRPM8表達(dá)(p＜0.01)，中劑量組可降低TRPA1(p＜0.001)、TRPM8(p＜0.001)、TRPV1(p＜0.01)表達(dá)，高劑量組明顯降低三者表達(dá)量(p＜0.001)，呈劑量依賴性。
　　3.RT-PCR顯示:與空白組相比，應(yīng)用OXA后各組大鼠DRG細(xì)胞T

5、RPV1、TRPA1、TRPM8mRNA表達(dá)顯著增加，與模型組相比，應(yīng)用當(dāng)歸四逆湯后各組均可顯著下調(diào)三者表達(dá)(p＜0.001)。
　　4.鈣成像顯示:與模型組相比，當(dāng)歸四逆湯組可以抑制大鼠DRG細(xì)胞TRPA1(p＜0.05)、TRPM8(p＜0.01)通道的激活。
　　結(jié)論：當(dāng)歸四逆湯可以減輕奧沙利鉑慢性神經(jīng)毒性。其可能機(jī)制:
　　1、減緩大鼠機(jī)械疼痛閾值下降程度，改善OXA對大鼠DRG細(xì)胞核仁大小的影響;