EBV轉(zhuǎn)化淋巴母細胞中CXCR4,c-FOS，F(xiàn)YN，PTPN11基因表達檢測與分析.pdf

1、[目的]前期課題組篩選出EBV誘導淋巴細胞轉(zhuǎn)化的4個關鍵分子，分別是CXCR4，c-FOS，F(xiàn)YN，PTPN11基因。本課題通過熒光定量PCR和Western blot技術檢測正常人淋巴細胞和體外EBV轉(zhuǎn)化淋巴母細胞中CXCR4，c-FOS，F(xiàn)YN，PTPN11差異表達情況，驗證前期課題組基因芯片結果，為EB病毒轉(zhuǎn)化淋巴細胞的分子機制提供實驗依據(jù)。
　　[方法]采集7例健康獻血員外周靜脈血并從中分離出正常人淋巴細胞，用EBV體外誘

2、導淋巴細胞轉(zhuǎn)化，構建永生化的淋巴母細胞模型。提取EBV轉(zhuǎn)化淋巴母細胞及配對的正常人淋巴細胞的蛋白及RNA，應用Western blot和熒光定量PCR方法，檢測CXCR4，c-FOS,FYN,PTPN11基因在7例EBV體外轉(zhuǎn)化的淋巴母細胞及配對的健康成人正常淋巴細胞中的表達。
　　[結果]本實驗成功建立了7例EBV轉(zhuǎn)化淋巴母細胞樣細胞系，并檢測了CXCR4,c-FOS,FYN,PTPN11基因在7例EBV轉(zhuǎn)化淋巴母細胞及配對的正

3、常人淋巴細胞中的表達情況。CXCR4基因在正常人淋巴細胞及轉(zhuǎn)化淋巴母細胞中均有表達，轉(zhuǎn)化細胞CXCR4的mRNA與正常人淋巴細胞相比，表達下調(diào)2.718倍，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；Western blot結果顯示，CXCR4在轉(zhuǎn)化細胞中的蛋白與正常人淋巴細胞相比，表達下調(diào)1.894倍，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。c-FOS基因在正常人淋巴細胞及轉(zhuǎn)化淋巴母細胞中均有表達，轉(zhuǎn)化細胞中c-FOS的mRNA與正常人淋巴細胞相

4、比，表達下調(diào)2.641倍，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；Western blot結果顯示，c-FOS在轉(zhuǎn)化細胞中的蛋白與正常人淋巴細胞相比，表達下調(diào)2.323倍，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。FYN基因在正常人淋巴細胞及轉(zhuǎn)化淋巴母細胞中均有表達，轉(zhuǎn)化細胞中FYN的mRNA與正常人淋巴細胞相比，表達下調(diào)2.451倍，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；Western blot結果顯示，F(xiàn)YN在轉(zhuǎn)化細胞中的蛋白與正常人淋巴細胞相

5、比，表達下調(diào)2.019倍，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。PTPN11基因在正常人淋巴細胞及轉(zhuǎn)化淋巴母細胞中均有表達，轉(zhuǎn)化細胞PTPN11的mRNA與正常人淋巴細胞相比，表達上調(diào)2.057倍，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；Western Blot結果顯示，PTPN11在轉(zhuǎn)化細胞中的蛋白與正常人淋巴細胞相比，表達上調(diào)2.127倍，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。
　　[結論]1. CXCR4在轉(zhuǎn)化淋巴母細胞中的蛋白表達