131I-antiEGFR-BSA-PCL核素納米載體的實驗研究.pdf

1、研究目的：
　　放射性核素治療是臨床上常用的治療原發(fā)的惡性腫瘤及惡性腫瘤轉(zhuǎn)移灶的有效方法，尤其是放射性碘用于治療甲狀腺癌以及放射性核素標(biāo)記的靶向性藥物治療惡性腫瘤在臨床上已經(jīng)是相當(dāng)成熟的治療方法。納米粒子以其粒徑小，容易被細(xì)胞攝取及其具有緩釋等特性，在作為抗腫瘤藥物的載體治療惡性腫瘤的中也發(fā)揮著巨大的作用。表皮生長因子（epidermal growth factor receptor，EGFR）在多種腫瘤細(xì)胞中高表達(dá)，且有大量的文

2、獻(xiàn)報道已經(jīng)證實，EGFR的高表達(dá)與腫瘤的不良預(yù)后有密切的關(guān)系，目前抗 EGFR靶向性藥物在惡性腫瘤的治療方面也已經(jīng)得到長足發(fā)展，很多抗 EGFR靶向性藥物已經(jīng)獲得了美國FDA認(rèn)證。然而，單一的治療方法在惡性腫瘤的治療過程中表現(xiàn)出很多弊端，故將放射性碘治療、納米粒子載體及靶向性抗EGFR藥物三者有效的結(jié)合起來，對于診斷及靶向性的治療高表達(dá)EGFR的惡性腫瘤具有潛在的研究價值。
　　方法：
　　（1）胎牛血清白蛋白（bovine

3、 serumalbumin，BSA）納米載體的合成：雙親性BSA-聚己內(nèi)酯(polycaprolactone,PCL)結(jié)合體的合成與結(jié)構(gòu)性能表征；BSA-PCL結(jié)合體的納米靶向藥物（西妥昔單抗）載體的構(gòu)建：利用制備的雙親性BSA-PCL結(jié)合體，通過自組裝技術(shù)，構(gòu)建了納米高分子脂質(zhì)體，并利用表面含有的功能基團(tuán)，對高分子脂質(zhì)體進(jìn)行表面靶向修飾。
　?。?）從細(xì)胞學(xué)水平實驗驗證高表達(dá)EGFR的腫瘤細(xì)胞能夠攝取納米載體：共聚焦顯微鏡、流式

4、細(xì)胞儀實驗驗證腫瘤細(xì)胞對antiEGFR-BSA-PCL、BSA-PCL兩種納米載體的攝取情況；MTT實驗驗證antiEGFR-BSA-PCL、BSA-PCL兩種納米載體的細(xì)胞毒性作用。
　?。?）納米載體的131I標(biāo)記及鑒定，并行細(xì)胞學(xué)水平實驗MTT法驗證131I標(biāo)記的納米載體對腫瘤細(xì)胞有殺傷作用。
　?。?）最后，在細(xì)胞實驗的基礎(chǔ)上，構(gòu)建荷瘤裸鼠模型，行131I標(biāo)記的兩種納米載體荷瘤裸鼠體內(nèi)注射，并進(jìn)行核素顯像及驗證13

5、1I標(biāo)記的兩種納米載體對裸鼠移植瘤的抑制生長作用，及對荷瘤裸鼠的生存周期的影響。
　　結(jié)果：
　?。?）成功制備了具有雙親性的納米載體（BSA-PCL），并成功的完成了抗EGFR抗體（西妥昔單抗）與納米載體的組裝（由天津大學(xué)材料學(xué)院常津教授實驗室課題組提供），同時從細(xì)胞學(xué)實驗水平證實了該納米載體對細(xì)胞具有很低的細(xì)胞毒性和較好的生物相容性。
　　（2）共聚焦顯微鏡及流式細(xì)胞儀實驗證實腫瘤細(xì)胞能夠攝取納米載體，并且細(xì)胞攝取

6、靶向性的抗EGFR納米載體的能力遠(yuǎn)高于非靶向性的納米載體，MTT實驗證實antiEGFR-BSA-PCL、BSA-PCL兩種納米載體本身對腫瘤細(xì)胞的生長有很低的細(xì)胞毒性。
　?。?）成功完成了131I的標(biāo)記，使用超濾管離心后得到標(biāo)記好的約370–690 MBq/mg的131I-antiEGFR-BSA-PCL和131I-BSA-PCL，標(biāo)記率在70％-85%之間，放化純?yōu)?5~98%。MTT實驗證實131I標(biāo)記的靶向性的antiE

7、GFR-BSA-PCL對腫瘤細(xì)胞的殺傷作用遠(yuǎn)高于非靶向性的納米載體。
　?。?）動物實驗：成功的構(gòu)建了膠質(zhì)瘤（U87）的裸鼠模型，成功的實現(xiàn)了131I-antiEGFR-BSA-PCL，131I-BSA-PCL兩種納米載體的核素顯像，131I-antiEGFR-BSA-PCL有很好的抑制腫瘤生長及延長荷瘤裸鼠生存周期作用。
　　結(jié)論：
　　高表達(dá)EGFR的腫瘤細(xì)胞能夠有效的攝取131I標(biāo)記的雙親性的antiEGFR-B