人精漿外泌體及以納米金星輸送在弱精子癥中的作用機(jī)制.pdf

1、全世界范圍內(nèi)15％～20％的育齡夫婦存在著不孕不育的問題，其中弱精子癥導(dǎo)致的不育率達(dá)15％。弱精子癥主要表現(xiàn)為精子活力低下。弱精子癥很少甚至沒有器質(zhì)性病理改變，這為診斷和治療帶來困難，且嚴(yán)重的弱精子癥進(jìn)行ICSI的成功率也很低，因此研究弱精子癥的致病機(jī)制具有重要意義。人精漿中存在大量外泌體，其能夠調(diào)控精子成熟運動，但是精漿外泌體調(diào)節(jié)精子運動的機(jī)制目前尚不明確，需要進(jìn)一步闡明。本課題通過分離正常人與弱精子癥患者精漿外泌體，應(yīng)用iTRAQ蛋

2、白質(zhì)組學(xué)技術(shù)鑒定兩者精漿外泌體差異蛋白，共鑒定出3699個精漿外泌體蛋白，其中，弱精子癥患者精漿外泌體相比正常人，11個蛋白含量顯著上調(diào)(＞1.2)，80個蛋白含量顯著下調(diào)(＜0.833)。通過免疫印跡實驗證實了TRPV6、ACE、PRSS8和PPAP2A等蛋白在弱精子癥患者精漿外泌體中顯著下調(diào)，驗證了本次蛋白組學(xué)的檢測結(jié)果。通過生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，這些差異蛋白主要集中在跨膜運輸和新陳代謝相關(guān)的生物學(xué)通路。我們在小鼠模型中證實TRPV6

3、在附睪頭部開始以附睪小體的形式從附睪轉(zhuǎn)移到精子表面，且通過免疫熒光發(fā)現(xiàn)TRPV6定位在人正常精子頂體和頸部位置，TRPV6在弱精子癥患者精漿外泌體中較正常人顯著下調(diào)，提示精漿外泌體的分泌紊亂與弱精子癥的發(fā)生密切相關(guān)。
　　納米金在生物醫(yī)藥領(lǐng)域受到越來越多的關(guān)注和應(yīng)用，很多納米金已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于基因運輸、藥物靶向運輸、生物成像、細(xì)胞標(biāo)記和高熱治療。然而生物體內(nèi)存在多個生物屏障，比如:血腦屏障、血胎屏障和血睪屏障，克服生物屏障是一個困

4、難而不可避免的問題，這限制了大量材料用于體內(nèi)藥物輸送，所以尋找一種有效穿透生物屏障的輸送載體也勢在必行。這里我們主要關(guān)注血睪屏障，我們合成五角納米金星，發(fā)現(xiàn)納米金星不僅在體外可以迅速的進(jìn)入生殖細(xì)胞系GC-2細(xì)胞，而且在體內(nèi)能夠克服血睪屏障進(jìn)入到生殖細(xì)胞中，我們利用納米金星處理GC2細(xì)胞和尾靜脈注射雄性ICR小鼠，發(fā)現(xiàn)納米金星并不影響GC2的增殖和凋亡，對睪丸曲細(xì)精管的結(jié)構(gòu)也無明顯影響，說明納米金星具有很好的生物相容性。此外，我們進(jìn)一步研