環(huán)狀RNA CDR1as調(diào)控膠質(zhì)瘤惡性生長的分子機(jī)制.pdf

1、目的:膠質(zhì)瘤是最常見的中樞神經(jīng)系統(tǒng)原發(fā)性惡性腫瘤，也是人類癌癥致死率最高的疾病之一。目前，膠質(zhì)瘤的治療以手術(shù)治療為主，但由于腫瘤浸潤性生長，與腦組織間無明顯邊界，難以作到全部切除，常遺有神經(jīng)功能缺失。國內(nèi)外有關(guān)腦膠質(zhì)瘤的臨床治療效果在近30年進(jìn)展最為緩慢，患者生存期無明顯改善。惡性膠質(zhì)瘤的發(fā)病機(jī)制至今仍不明確。因此，對惡性膠質(zhì)瘤的分子機(jī)制進(jìn)行深入研究，從而發(fā)現(xiàn)更為有效的治療靶標(biāo)和治療方案，就顯得十分迫切和必要。環(huán)狀RNAs(circul

2、ar RNA)作為一類新發(fā)現(xiàn)的非編碼RNA分子，可能對細(xì)胞生物學(xué)行為發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用。最新的研究顯示，環(huán)狀RNAs可大量表達(dá)于腫瘤細(xì)胞中，而它們的表達(dá)異常是否與腫瘤的發(fā)生發(fā)展相關(guān)，尚待進(jìn)一步的研究。本研究旨在通過敲減實(shí)驗(yàn)闡明環(huán)狀RNA CDR1as調(diào)控膠質(zhì)瘤惡性生長的作用機(jī)制，為該疾病的有效防治提供新策略。
　　方法:1、根據(jù)Circbase數(shù)據(jù)庫提供的CDR1as基因序列設(shè)計(jì)合成特異引物，利用RT-qPCR檢測膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中

3、CDR1as的表達(dá)水平。2、構(gòu)建CDR1as shRNA敲減載體。3、MTT檢測CDR1as對膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖的影響。4、流式細(xì)胞術(shù)檢測CDR1as對膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡及周期的影響。5、敲減處理膠質(zhì)瘤細(xì)胞系，RT-qPCR檢測CDR1as的表達(dá)，同時(shí)用RT-qPCR及Western Blot檢測CDR1as下游靶標(biāo)P53的變化。
　　結(jié)果:1、RT-qPCR檢測膠質(zhì)瘤細(xì)胞系，發(fā)現(xiàn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系普遍低表達(dá)或不表達(dá)CDR1as。2、利用CDR

4、1 as shRNA敲減載體處理膠質(zhì)瘤細(xì)胞48h后，MTT檢測細(xì)胞增殖，與對照組相比，處理組細(xì)胞增殖能力明顯升高。3、利用CDR1as shRNA敲減載體處理膠質(zhì)瘤細(xì)胞48h后，用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡及周期，發(fā)現(xiàn)與對照組相比，處理組細(xì)胞凋亡減少，細(xì)胞周期G0/G1期降低，且S期明顯升高。4、利用CDR1as shRNA敲減載體處理膠質(zhì)瘤細(xì)胞系后，CDR1as及P53的表達(dá)明顯降低。
　　結(jié)論:環(huán)狀RNA CDR1as在多數(shù)惡性膠