紅斑狼瘡動脈粥樣硬化小鼠模型建立、發(fā)病機制及痙氯喹干預研究.pdf

1、目的：
　　1.建立穩(wěn)定的系統(tǒng)性紅斑狼瘡動脈粥樣硬化動物模型。
　　2.利用小鼠模型，觀察系統(tǒng)性紅斑狼瘡(Systemic Lupus Erythematosus，SLE)對動脈粥樣硬化嚴重程度的影響。
　　3.進一步觀察狼瘡動脈粥樣硬化病變特點，尤其是免疫系統(tǒng)在動脈局部以及全身的改變，以及血脂變化特點，初步探討狼瘡動脈粥樣硬化發(fā)病的潛在機制。
　　4.研究常用的抗SLE藥物——羥氯喹(hydroxychloro

2、quine，HCQ)對動脈粥樣硬化的影響，并初步觀察其對血脂以及炎癥反應的影響，為臨床上治療動脈粥樣硬化提供新的選擇。
　　方法：
　　1.應用apoE-/-以及C57BL/6小鼠，8周齡時通過腹腔內(nèi)一次性注射0.5mlpristane構(gòu)建SLE模型。部分小鼠通過飲水給予HCQ。
　　2.通過檢測自身抗體水平檢驗狼瘡模型構(gòu)造是否成功，通過觀察動脈粥樣硬化斑塊是否形成明確動脈粥樣硬化模型構(gòu)建是否成功。
　　3.6個

3、月后檢測尿蛋白，處死小鼠。分離血清，檢測血脂、白蛋白、總IgG、干擾素α(interferon-α，IFN-α)。
　　4.分離小鼠主動脈、心臟，進行主動脈大體油紅O染色，主動脈流式細胞術(shù)檢測CD45+、CD19+、CD68+、CD11c+細胞，主動脈瓣根部組織連續(xù)冰凍切片，進行油紅O染色、IgG免疫熒光染色、CD19+、CD68+、CD11c+細胞免疫熒光染色。
　　5.制備脾細胞懸液，流式細胞術(shù)檢測CD3+、CD19+、

4、CD11b+、CD11c+細胞比例。
　　結(jié)果：
　　1.模型構(gòu)建成功:注射了pristane的小鼠dsDNA抗體陽性。服用HCQ導致注射了pristane的小鼠dsDNA抗體陽性率降低。
　　2.小鼠外觀變化:部分狼瘡小鼠出現(xiàn)脫毛、皮膚出血，非狼瘡小鼠無上述現(xiàn)象。
　　3.apoE-/-小鼠體重更重。
　　4.生化指標:
　　apoE-/-小鼠LDL-C、TC高于C57BL/6小鼠。
　　高脂

5、飼料喂養(yǎng)的小鼠LDL-C、TC高于普通飲食小鼠。
　　狼瘡發(fā)病對LDL-C無影響，狼瘡小鼠TC低于非狼瘡小鼠。
　　HCQ對LDL-C、TC水平無顯著性影響，輕度降低血脂。
　　狼瘡小鼠Alb低于非狼瘡小鼠，羥氯喹對Alb水平無影響。
　　5.動脈粥樣硬化斑塊進展情況:
　　狼瘡小鼠主動脈斑塊面積大于非狼瘡小鼠，高脂飼料喂養(yǎng)小鼠斑塊面積多于普通飲食小鼠。至處死時，只有apoE-/-小鼠主動脈出現(xiàn)了斑塊，所有

6、C57BL/6小鼠都沒有觀察到主動脈斑塊。
　　狼瘡小鼠主動脈瓣根部斑塊面積大于非狼瘡小鼠，高臘飼料喂養(yǎng)的小鼠主動脈瓣根部斑塊面積多于普通飲食小鼠。只有apoE-/-小鼠主動脈瓣根部有斑塊，所有C57BL/6小鼠都沒有觀察到主動脈瓣根部斑塊。狼瘡對主動脈瓣根部斑塊的促進作用在高脂飼料喂養(yǎng)的apoE-/-小鼠中更明顯。
　　羥氯喹具有抑制主動脈斑塊以及主動脈瓣根部斑塊形成的作用。
　　6.斑塊成分特點:
　　狼瘡發(fā)

7、病導致主動脈細胞增加，apoE-/-小鼠主動脈細胞數(shù)目多于C57BL/6小鼠。使用羥氯喹減少主動脈細胞數(shù)目。
　　狼瘡小鼠主動脈白細胞總數(shù)、樹突狀細胞、巨噬細胞數(shù)量增加，B細胞減少。
　　羥氯喹降低狼瘡小鼠主動脈白細胞、樹突狀細胞、巨噬細胞數(shù)目，增加狼瘡小鼠B細胞數(shù)目，對非狼瘡小鼠主動脈細胞數(shù)目無影響。
　　狼瘡小鼠CD68+巨噬細胞和CD11c+樹突狀細胞定位基本一致。
　　大量IgG沉積在主動脈瓣根部，B細胞

8、也聚集在IgG沉積部位。狼瘡小鼠斑塊中IgG沉積增多，且更加質(zhì)密，高脂飼料喂養(yǎng)導致IgG沉積增多。羥氯喹顯著減少apoE-/-小鼠主動脈斑塊IgG沉積。
　　狼瘡小鼠血清IgG高于非狼瘡小鼠，高脂飼料喂養(yǎng)的小鼠血清IgG低于普通飲食小鼠，apoE-/-小鼠IgG低于C57BL/6小鼠。HCQ對血清IgG水平無影響。主動脈斑塊IgG沉積與血清IgG含量呈低度負相關(guān)。
　　7.狼瘡發(fā)病、小鼠動脈硬化易感的基因型導致脾臟指數(shù)增加，

9、高脂飼料、羥氯喹對脾臟指數(shù)無影響。
　　狼瘡小鼠脾臟淋巴細胞減少，高脂飼料也導致脾臟淋巴細胞減少。羥氯喹對小鼠脾臟B細胞比例無影響。羥氯喹增加狼瘡小鼠脾臟T細胞比例，對非狼瘡小鼠脾臟T細胞比例無影響。
　　狼瘡小鼠脾臟CD11 c+細胞增多，高脂飼料導致脾臟CD11 c+細胞減少。羥氯喹對小鼠脾臟CD11c+細胞比例無顯著影響。
　　狼瘡小鼠脾臟CD11b+細胞無顯著變化，羥氯喹對脾臟CD11b+細胞比例無影響。

10、>　　8.狼瘡小鼠尿蛋白高于非狼瘡小鼠。HCQ不影響apoE-/-小鼠尿蛋白水平，但是降低C57BL/6小鼠尿蛋白水平。
　　9.個別狼瘡小鼠血清IFN-α升高，無統(tǒng)計學顯著性。
　　結(jié)論：
　　1.apoE-/-、C57BL/6小鼠通過腹腔注射pristane可以成功誘導狼瘡疾病模型，
　　2.apoE-/-小鼠容易出現(xiàn)主動脈粥樣硬化斑塊，C57BL/6小鼠不出現(xiàn)明顯斑塊。
　　3.狼瘡小鼠動脈粥樣硬化加

11、重。
　　4.狼瘡小鼠的心血管傳統(tǒng)危險因素（總膽固醇）降低，但是狼瘡小鼠主動脈內(nèi)炎性反應異常活躍（樹突狀細胞、巨噬細胞增多，B細胞減少，IgG沉積增多）;同時出現(xiàn)全身免疫狀態(tài)異常（脾臟淋巴細胞減少，樹突狀細胞增多，血清白蛋白降低，IgG升高）。
　　5.羥氯喹可以降低dsDNA抗體，可以減輕動脈粥樣硬化。
　　6.羥氯喹對血脂無顯著性影響，可以部分逆轉(zhuǎn)狼瘡所致的動脈粥樣硬化的斑塊成分異常以及脾臟細胞比例異常。