內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)在難免性壓瘡中的作用及細(xì)胞損傷信號(hào)通路研究.pdf

1、第一部分內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分子伴侶蛋白在難免性壓瘡中的表達(dá)
　　 目的:觀察內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分子伴侶蛋白葡萄糖調(diào)節(jié)因子78(GRP78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)和天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶12(caspase-12)在難免性壓瘡中不同階段的動(dòng)態(tài)變化，探討難免性壓瘡與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(ERS)介導(dǎo)的細(xì)胞損傷的關(guān)系。
　　 方法:將40只雄性SD大鼠隨機(jī)分為5組(n=8)即對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組分為1個(gè)周期組（1 c組），3個(gè)周期組（3 c組），6個(gè)

2、周期組（6 c組），9個(gè)周期組(9 c組)。實(shí)驗(yàn)組采用特制的壓力裝置對(duì)受壓部位進(jìn)行施壓，對(duì)照組未施壓力。各組大鼠于實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)給予安樂(lè)死。采用HE染色觀察受壓組織病理改變;SABC免疫組織化學(xué)法和western blot檢測(cè)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分子伴侶蛋白GRP78，CHOP，caspase-12在受壓肌組織不同時(shí)間點(diǎn)的動(dòng)態(tài)變化;Hoechst染色檢測(cè)肌細(xì)胞核凋亡情況。
　　 結(jié)果:
　　 (1) HE染色光鏡下觀察到，受壓肌肉組織呈現(xiàn)逐

3、漸退化的病理改變;受壓皮膚組織僅表現(xiàn)為表皮變薄，在9c組出現(xiàn)真皮組織附屬器的缺失;
　　 (2) SABC免疫組織化學(xué)法結(jié)果顯示，不同時(shí)間點(diǎn)的GRP78，CHOP，caspase-12蛋白表達(dá)均高于對(duì)照組，棕黃色顆粒表達(dá)主要在胞漿和細(xì)胞核;
　　 (3) Western blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，GRP78蛋白表達(dá)總體呈上升趨勢(shì)，表現(xiàn)為1c組表達(dá)不明顯，3 c組達(dá)到峰值，6 c、9 c組下降，但仍高于對(duì)照組;CHOP蛋白表達(dá)呈上

4、升趨勢(shì)，1 c組表達(dá)顯著，3 c組開(kāi)始下降，但仍高于對(duì)照組，6 c組下降明顯，9 c組再次升高;caspase-12蛋白表達(dá)也呈上升趨勢(shì)，1 c組表達(dá)明顯，3c組下降，6e組升高，9c組達(dá)到峰值;
　　 (4) Hoechst染色熒光顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比，受壓組織細(xì)胞核凋亡程度呈上升趨勢(shì)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論：
　　 (1)壓瘡首先起始于皮下深部組織損傷;(2)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(ERS)參與了難免性壓

5、瘡損傷過(guò)程;(3)早期ERS通過(guò)誘導(dǎo)GRP78、CHOP、caspapse-12蛋白的表達(dá)在難免性壓瘡損傷過(guò)程中的起細(xì)胞保護(hù)性作用;(4) CHOP、caspase-12蛋白在受壓組織中過(guò)表達(dá)，表明嚴(yán)重的ERS參與了受壓組織細(xì)胞凋亡的病理過(guò)程，難免性壓瘡可能與ERS介導(dǎo)的細(xì)胞損傷有關(guān)，這可能是導(dǎo)致壓瘡難以預(yù)防及愈合的重要原因。
　　 第二部分探討內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激參與難免性壓瘡的細(xì)胞分子信號(hào)通路
　　 目的：分析內(nèi)質(zhì)網(wǎng)伴侶蛋白及

6、Akt、GSK3β及其磷酸化程度在難免性壓瘡損傷中不同階段（實(shí)驗(yàn)組和恢復(fù)組）的表達(dá)變化，探討ERS參與難免性壓瘡的細(xì)胞分子信號(hào)通路。
　　 方法：將54只雄性SD大鼠隨機(jī)分為9組(n=6)即對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組又分為1個(gè)周期組（1 c組），3個(gè)周期組（3 c組），6個(gè)周期組（6 c組），9個(gè)周期組(9 c組)，完全解除壓力后恢復(fù)組分為1天組(1d)，3天組(3d)，5天組(5d)，7天組(7d)，各組大鼠于實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)給予安樂(lè)死。采用HE

7、染色，觀察受壓組織在實(shí)驗(yàn)組和恢復(fù)組不同階段的病理改變;Western blot檢測(cè)受壓組織中GRP78、CHOP、caspase-12及蛋白Akt、GSK3β、p-Akt、p-GSK3β在實(shí)驗(yàn)組和恢復(fù)組不同階段的動(dòng)態(tài)變化。
　　 結(jié)果：
　　 (1) HE染色光鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，受壓肌肉組織呈現(xiàn)逐步退化的過(guò)程，在恢復(fù)組，初期壞死區(qū)域炎性細(xì)胞大量聚集，隨時(shí)間延長(zhǎng)炎性細(xì)胞逐漸減少，但還存在大量的肌纖維紊亂、斷裂，壞死碎片等病理現(xiàn)

8、象;
　　 (2) Western blot檢測(cè)受壓組織中伴侶蛋白GRP78、CHOP、caspase-12發(fā)現(xiàn)，蛋白GRP78表達(dá)總體上呈上升趨勢(shì)，3c組出現(xiàn)第一次峰值，之后略有下降，在恢復(fù)組第1d GRP78表達(dá)顯著，第5d出現(xiàn)第二次峰值，第7d開(kāi)始下降，但仍高于正常組;CHOP蛋白的表達(dá)總體呈上升趨勢(shì)，1c組表達(dá)顯著，之后略有下降，9c組出現(xiàn)第一次高峰，恢復(fù)組第1d，3d CHOP蛋白表達(dá)下降，第5d表達(dá)又開(kāi)始上升，第7d

9、表達(dá)達(dá)高峰;caspase-12蛋白表達(dá)也呈上升趨勢(shì)，6c組表達(dá)顯著，9c組出現(xiàn)第一次峰值，恢復(fù)組第1d，3d持續(xù)高表達(dá)，之后略有下降，但仍明顯高于正常組。
　　 (3) Western blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，p-Akt蛋白表達(dá)呈先上升后逐漸下降的趨勢(shì)，1c組，表達(dá)顯著升高，3c，6c組下降，9c組蛋白表達(dá)下降最為明顯，恢復(fù)組p-Akt蛋白表達(dá)呈先上升后下降的趨勢(shì)，表現(xiàn)為第1d表達(dá)開(kāi)始增加，第3d表達(dá)呈現(xiàn)第一次高峰，隨后略有下降;p

10、-GSK3β蛋白表達(dá)呈先上升后下降的趨勢(shì)，1c組，3c組表達(dá)開(kāi)始升高，6c組表達(dá)開(kāi)始下降，9c組表達(dá)下降最為明顯，在恢復(fù)組p-GSK3β蛋白表達(dá)呈先下降后上升趨勢(shì)，表現(xiàn)為與9c組相比，第1d略有下降，第3d下降明顯，第5d表達(dá)開(kāi)始增加，第7d表達(dá)出現(xiàn)高峰。
　　 結(jié)論：
　　 (1)難免性壓瘡難以愈合的原因可能與深部組織肌肉損傷存在密切的聯(lián)系;
　　 (2) ERS介導(dǎo)的細(xì)胞損傷參與了難免性壓瘡損傷過(guò)程;(3)