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文檔簡介
1、目的:觀察B細胞轉(zhuǎn)化為漿細胞后,不同濃度的MPA對漿細胞存活及抗體產(chǎn)生的影響,為臨床使用MMF抑制血型抗體反彈提供的實驗依據(jù)。
方法:①CCK8法觀察 MPA對 B淋巴細胞的增殖抑制作用。設(shè)置0.03、0.3、3、30umol/L四個MPA濃度組及DMSO溶媒對照組、空白對照組,通過酶標(biāo)儀測定藥物分別作用24h、36h、48h后的OD值,繪制出抑制率與MPA濃度和作用時間關(guān)系圖;②選定最適MPA濃度,分別作用于B淋巴細胞后,顯
2、微鏡下觀察各組細胞的變化;③ELISA法檢測MPA對B淋巴細胞抗體產(chǎn)生的抑制效果。將相同濃度的細胞接種于6孔板上,待細胞濃度達到106后,使用PWN刺激B細胞3-5天待其轉(zhuǎn)化為漿細胞后,分別向各孔加入不同濃度MPA,及硼替佐米,4-6天后離心收集細胞上清液,ELISA法檢測各組細胞IgM、IgG表達量。④流式細胞術(shù)檢測漿細胞的轉(zhuǎn)化率。將相同濃度的細胞接種于6孔板上,待細胞濃度達到106后,使用PWN刺激B細胞3-5天轉(zhuǎn)化為漿細胞后,分別
3、向各孔加入不同濃度MPA,及硼替佐米,作用4-6天后流式細胞術(shù)法檢測處理后各組細胞 CD19(-)CD38(+)漿細胞的百分率;⑤PCR法檢測MPA對B淋巴細胞活化為漿細胞的影響。將相同濃度的細胞接種于6孔板上,待細胞濃度達到106后,使用PWN刺激B細胞3天轉(zhuǎn)化為漿細胞后,分別向各孔加入不同濃度MPA,及硼替佐米,作用4-6天后,PCR法檢測各組細胞內(nèi)IMPDH2的表達情況;
結(jié)果:①MPA對B細胞增殖有抑制作用,0.03u
4、mol/L的MPA抑制不明顯,30umol/L,隨著藥物濃度增大,B細胞存活率從81.7%(0.3umol/L)下降到61.2%(30umol/L),隨著時間增加0.3umol/L MPA組存活率從81.7%(24h)下降到64.15%(48h),30umol/L MPA組存活率從61.2%(24h)下降到38.79%(48h);②MPA抑制漿細胞的IMPDH2表達;當(dāng) MPA濃度達到30umol/L時,IMPDH2表達明顯減少,而0.
5、3-3umol/L與對照組對比不明顯,硼替佐米組幾乎為0;③MPA可以降低CD19(-)CD38(+)漿細胞的存活率,0.3umol/L MPA組存活率為14.5%,而30umol/L MPA組存活率下降到8.2%;④IgG抗體產(chǎn)生隨時間變化與對照組比較,0.3umol-30umol/L(第四天)MPA組由396.9ug/mL減少到289.1ug/mL,較對照組494.1ug/mL明顯減少,0.3umol-30umol/L(第六天)MP
6、A組由986ug/mL減少到460ug/mL,較對照組2205ug/mL明顯減少,而低濃度 MPA對 IgM產(chǎn)生影響不大,0.3umol/L(第四天)MPA組254.6ng/mL較對照組255.8ng/mL無統(tǒng)計學(xué)意義,而3umol/L與30umol/L較對照組減少,由210.3ng/mL減少至190.7ng/mL,硼替佐米組122.7ng/mL較對照組明顯減少,第六天隨著MPA濃度增加,IgM產(chǎn)生量減少,具有統(tǒng)計學(xué)意義。
結(jié)
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