B淋巴細胞刺激因子及其全人源性抗體的表達和性質(zhì)研究.pdf

1、B 淋巴細胞刺激因子(BAFF)屬于腫瘤壞死因子超家族的成員，在刺激B 細胞增殖及成熟方面具有重要作用。BAFF在anti-IgM 存在的情況下能專一刺激B細胞的增殖和分化，因而在體液免疫中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用，特別是對T1 期B淋巴細胞的正常發(fā)育、脾臟生發(fā)中心的形成和免疫球蛋白的分泌尤為重要。其缺陷和過度表達均能引起機體免疫失衡，從而誘發(fā)多種自身免疫性疾病。同時BAFF 也是某些B 細胞淋巴瘤的存活因子。因此，BAFF 抑制劑的開發(fā)有望

2、成為治療某些自身免疫性疾病和一些B 系淋巴瘤的新型藥物。
　　 1．人BAFF在大腸桿菌中的SUMO 融合表達及性質(zhì)鑒定此前hsBAFF 蛋白的獲取基本上是通過變復(fù)性手段。而包涵體的變復(fù)性過程相當(dāng)復(fù)雜和繁瑣。如果能夠盡量地以可溶的形式表達，那就會大大簡化hsBAFF蛋白的純化生產(chǎn)過程。我們利用SUMO 融合表達技術(shù)，高可溶性的在大腸桿菌中原核表達了His6-SUMO-hsBAFF，并對其進行了酶切和純化，最終hsBAFF 蛋白得

3、率要優(yōu)于以往的變復(fù)性工藝。并且，hsBAFF 也表現(xiàn)出了明顯刺激B 淋巴細胞增殖以及和BAFF 抗體免疫識別的作用。
　　 2．BAFF 人源性抗體在CHO 細胞中的穩(wěn)定表達及性質(zhì)鑒定為了開發(fā)靶向人類自身免疫性疾病的基因工程藥物，我們?nèi)诤狭薆AFF的單鏈抗體片斷(scFv)和人IgG1 Fc 片段，設(shè)計了BAFF的全人源性基因工程抗體——scFv-Fc，將其亞克隆至pEE14 載體并在真核系統(tǒng)中進行穩(wěn)定表達。表達產(chǎn)物經(jīng)過Prot