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文檔簡介
1、豬增生性腸炎(PPE)是由胞內(nèi)勞森氏菌(Lawsonia Intracellularis,LI)引起的接觸性傳染病,是一種具有重要經(jīng)濟(jì)意義的世界性疾病。該病呈全球性流行,國內(nèi)臨床可疑病例有增多趨勢,豬群感染率高。胞內(nèi)勞森氏菌宿主廣泛,是豬腸道疾病綜合征(PEDC)的關(guān)鍵性病原之一,對全球養(yǎng)豬業(yè)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。因此,了解PPE的流行情況并研究其病原,對防制該病和促進(jìn)養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展具有重要意義。 本研究優(yōu)化了豬增生性腸炎的PCR
2、診斷方法,能用于活體檢測。從疑似病變的豬回腸中擴(kuò)增出胞內(nèi)勞森氏菌的基因,與GenBank上各株胞內(nèi)勞森氏菌核苷酸同源性在98.9%-100%之間,證實(shí)廣西豬群存在豬胞內(nèi)勞森氏菌的感染;對廣西豬群增生性腸炎調(diào)查顯示,屠宰豬和斷奶仔豬平均感染率分別為15.6%和13.5%,應(yīng)引起重視。 以感染豬回腸粘膜為材料,成功將本研究所得的GXNN株胞內(nèi)勞森氏菌接種到兔體。動物感染試驗(yàn)表明,豬源胞內(nèi)勞森氏菌可以用兔體接種保存,該菌可以人工感染小
3、鼠;GXNN株胞內(nèi)勞森氏菌對兔子和小鼠致病性相似,初步建立其動物感染模型。將GXNN株胞內(nèi)勞森氏菌接種到豬后能復(fù)制出PPE,表明該菌是PPE的病原。對人工感染豬組織進(jìn)行HE切片染色,證實(shí)胞內(nèi)勞森氏菌可以引起豬回腸、結(jié)腸腺窩上皮細(xì)胞的增生。 設(shè)計(jì)特異性引物,克隆GXNN株胞內(nèi)勞森氏菌的16SrRNA基因。核苷酸同源性分析顯示,GXNN株與不同動物源性胞內(nèi)勞森氏菌16SrRNA核苷酸同源性在98.4%~100%;與其他種類原核微生物
4、16SrRNA核苷酸同源性在71.8%~88.6%。 克隆GXNN株胞內(nèi)勞森氏菌的三個外膜蛋白基因和一個表面脂蛋白基因(LI1022,LI1024,LI0902,LI0235),與己發(fā)表菌株AM180252核苷酸同源性分別為99.8%,99.5%,99.8%,99.8%;氨基酸同源性分別為99.4%,98.8%,99.3%,98.9%。分別將四個基因連接至PET32a+載體并轉(zhuǎn)化至BL21,經(jīng)酶切鑒定和序列測定后表明插入位置正確
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