初生廣西巴馬小型豬骨發(fā)育相關(guān)基因的初步研究.pdf

1、動(dòng)物體型大小主要是由骨組織和肌肉組織發(fā)育決定。動(dòng)物機(jī)體大部分骨組織是通過(guò)軟骨內(nèi)成骨方式形成，而骨骺生長(zhǎng)板的發(fā)育則最終決定軟骨內(nèi)成骨的形態(tài)。骨形成蛋白2(bone morphogenetic protein2，BMP2)是動(dòng)物出生后骨骼內(nèi)穩(wěn)態(tài)的重要調(diào)節(jié)因子，它提供的成骨信號(hào)是骨組織發(fā)生和修復(fù)所必須的。成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子3（fibroblast growth factors，F(xiàn)GFR3）則主要作用于軟骨的發(fā)育，季肋發(fā)育不全、軟骨發(fā)育不全和致

2、死性發(fā)育不全這三種人類(lèi)可遺傳侏儒綜合征都是由FGFR3基因的錯(cuò)義突變引起的。目前，豬FGFR3基因與骨發(fā)育的相關(guān)性研究在國(guó)內(nèi)外仍是空白。NCBI報(bào)道的豬FGFR3基因序列是利用生物信息學(xué)方法預(yù)測(cè)獲得的序列，目前尚未有相關(guān)的該基因CDS克隆的報(bào)道。cDNA-AFLP擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性(cDNAamplified fragments length polymorphism，cDNA-AFLP)測(cè)定技術(shù)具有重復(fù)性好、假陽(yáng)性率低、起始樣本需求量

3、少等優(yōu)點(diǎn)，不需要預(yù)先知道序列信息即可篩選差異表達(dá)基因，通過(guò)此方法可以發(fā)現(xiàn)新基因或基因的新功能，常應(yīng)用于基因表達(dá)差異顯示的研究中。
　　本課題以1日齡廣西巴馬小型豬和長(zhǎng)白豬為研究對(duì)象，分別克隆了這兩個(gè)品種豬BMP2和FGFR3基因CDS序列，并對(duì)其在四肢骨生長(zhǎng)板的表達(dá)情況進(jìn)行了測(cè)定比較，并采用cDNA-AFLP技術(shù)對(duì)兩品種豬軟骨發(fā)育相關(guān)基因的差異表達(dá)進(jìn)行了測(cè)定，旨在篩選影響骨發(fā)育的功能基因，為實(shí)驗(yàn)用廣西巴馬小型豬的選育提供遺傳標(biāo)記，

4、獲得結(jié)果如下:
　　1.成功克隆了廣西巴馬小型豬、長(zhǎng)白豬BMP2 CDS全長(zhǎng)序列，共1188bp，兩個(gè)品種豬BMP2的CDS序列完全一致。
　　2.成功克隆了長(zhǎng)白豬和廣西巴馬小型豬FGFR3 CDS部分序列，共808bp。將測(cè)序結(jié)果與NCBI報(bào)道的豬FGFR3預(yù)測(cè)序列比對(duì)，發(fā)現(xiàn)存在八處堿基發(fā)生突變，一處堿基缺失。其中五處突變位點(diǎn)為長(zhǎng)白豬和廣西巴馬小型豬所共有，分別為A124G、C190G、A204C、C205A和C245T的

5、錯(cuò)義突變;另三處突變位點(diǎn)和一處堿基缺失表現(xiàn)為廣西巴馬小型豬A438G和C549T的同義突變、長(zhǎng)白豬A752C的錯(cuò)義突變和長(zhǎng)白豬的328～330的3個(gè)堿基(GCA)缺失。
　　3.廣西巴馬小型豬、長(zhǎng)白豬FGFR3基因A2374G、C2620T多態(tài)性位點(diǎn)的基因型及基因頻率在兩個(gè)品種豬間分布差異均極顯著(P＜0.01)，兩個(gè)基因座處于連鎖平衡狀態(tài)。
　　4.利用SMARTer RACE技術(shù)獲得豬FGFR3基因5'末端序列1條，3'

6、末端序列3條，拼接獲得豬FGFR3 CDS序列3條，并確定了豬FGFR3基因翻譯的起始密碼子位點(diǎn)。
　　5.1日齡的廣西巴馬小型豬與同日齡長(zhǎng)白豬比較，體重、體長(zhǎng)和體高差異均極顯著(P＜0.01)，股骨長(zhǎng)差異顯著(P＜0.05)。1日齡廣西巴馬小型豬生長(zhǎng)板BMP2表達(dá)量顯著低于長(zhǎng)白豬(P＜0.05); FGFR3表達(dá)量顯著高于長(zhǎng)白豬(P＜0.01)。
　　6.通過(guò)cDNA-AFLP分析獲得18條在1日齡廣西巴馬小型豬、長(zhǎng)白豬生