小黑楊PsnOBP1在轉(zhuǎn)基因煙草次生生長中的功能研究.pdf

1、OBP1(OBF binding protein)為Dof（DNA binding with one finger）類轉(zhuǎn)錄因子，屬于鋅指蛋白超家族（zinc finger super-family）的成員，是一類植物特有的轉(zhuǎn)錄因子。OBP1轉(zhuǎn)錄因子能夠通過調(diào)控細(xì)胞周期蛋白基因參與植物的生長發(fā)育過程。本項(xiàng)研究從小黑楊（Populus simonii×P.nigra）中克隆了OBP1的全長cDNA序列，因其與擬南芥OBP1相似性達(dá)99％，因

2、此命名為PsnOBP1。通過對(duì)PsnOBP1基本特性與過表達(dá)煙草主要生長與次生性狀分析，得到以下結(jié)論。
　　(1)PsnOBP1基因編碼248個(gè)氨基酸，其分子量為25.5 kDa，等電點(diǎn)為8.57，屬于鋅指蛋白超家族的Dof轉(zhuǎn)錄因子。
　　(2)PsnOBP1組織表達(dá)特異性研究表明，PsnOBP1基因在小黑楊的各個(gè)組織中均有表達(dá)，但在木質(zhì)部表達(dá)量很高，其次為根部及葉部組織。洋蔥表皮細(xì)胞瞬時(shí)表達(dá)研究發(fā)現(xiàn)，PsnOBP1編碼蛋白

3、定位在細(xì)胞核中。利用酵母單雜交對(duì)PsnOBP1轉(zhuǎn)錄結(jié)合能力進(jìn)行分析，結(jié)果表明PsnOBP1能與次生細(xì)胞壁形成基因（如MYB61，MYB63，MYB43，MYB92）啟動(dòng)子區(qū)域高頻率元件GA-motif、GARE-motif、TCA和HSE結(jié)合。
　　(3)過表達(dá)PsnOBP1煙草主要生長性狀與次生性狀分析表明，相比野生型，轉(zhuǎn)基因株系的莖稈強(qiáng)度、葉綠素含量、纖維長度和寬度和纖維素含量均顯著增加，次生細(xì)胞壁厚的明顯增加，而木質(zhì)素含量顯

4、著下降;轉(zhuǎn)基因株系次生細(xì)胞壁形成相關(guān)功能基因的表達(dá)均發(fā)生了不同程度的變化，其中纖維素（CesA4，CesA7，CesA8)、半纖維素形成基因（CesA4，CesA7，CesA8)表達(dá)量顯著上調(diào)，而木質(zhì)素形成基因（IRX8，IRX9，F(xiàn)RA8表達(dá)量下調(diào);轉(zhuǎn)基因株系生長發(fā)育正常，能正常開花結(jié)實(shí)，且株高、生物量與野生型相比，無顯著差異。
　　(4)擬南芥AtOBP1突變體的次生性狀分析:與正常的野生型擬南芥相比株高與葉片大小無明顯變化，