內皮細胞來源外泌體對缺血再灌注損傷后神經(jīng)保護作用的研究.pdf

1、分類號：密級：UDC：學號：406521214090南昌大學碩士學位研究生學位論文內皮細胞來源外泌體對缺血再灌注損傷內皮細胞來源外泌體對缺血再灌注損傷后神經(jīng)保護作用的研究神經(jīng)保護作用的研究TheresearchofEndothelialcellderivedexosomeinneuroprotectionafterischemiareperfusioninjury柴毅培養(yǎng)單位（院、系）：南昌大學第二附屬醫(yī)院指導教師姓名、職稱：祝新根教授

2、主任醫(yī)師唐尤佳教授主任醫(yī)師申請學位的學科門類：醫(yī)學碩士學科專業(yè)名稱：外科學（神外）論文答辯日期：2017年6月答辯委員會主席：錢鎖開評閱人：李美華萬登峰2017年5月中文摘要II中文摘要中文摘要目的目的在腦缺血的治療中，遠程缺血后處理（Remoteischemiapostconditioning，RIP）能減少缺血再灌注（ischemiareperfusion，IR）損傷，然而，其機制未明。在本研究中，我們推測RIP對腦IR損傷的神經(jīng)保

3、護作用是由內皮細胞釋放的外泌體所介導的，探討外泌體對人SHSY5Y神經(jīng)細胞IR損傷后的影響。方法方法1.第一步建立大鼠右側大腦中動脈缺血再灌注模型、遠程缺血后處理模型，采用TTC染色、HE染色、免疫組織化學染色檢測大鼠大腦組織，評估損傷程度。2.第二步建立人臍靜脈血管內皮細胞（humanumbilicalveinendothelialcells，HUVECs）缺氧再灌注損傷模型（HUVECIR）及人SHSY5Y神經(jīng)細胞細胞缺氧再灌注模型

4、（SHSY5YIR），流式細胞術檢測細胞凋亡情況，確定缺氧再灌注（IR）時間；分別提取動物血清及HUVECs培養(yǎng)上清液中的外泌體(Exosome)，電鏡鑒定外泌體形態(tài)，粒徑分析外泌體數(shù)量；采用免疫組化染色檢測各組大鼠腦海馬組織中外泌體標記蛋白CD63HSP70TSG101的表達量變化；Westernblot與流式細胞儀檢測血清中Exosome特異性蛋白CD63、HSP70和TSG101。3.第三步研究HUVEC來源外泌體對IR損傷后的S

5、HSY5Y細胞增殖、凋亡、細胞周期、遷移及侵襲能力的影響，同時，檢測凋亡相關分子Caspase3、Bax和Bcl2的表達。結果結果1、成功建立大鼠右側大腦中動脈缺血再灌注模型、遠程缺血后處理模型；并檢測再灌注24h后大鼠大腦梗死程度：a.TTC染色結果提示缺血后處理（RIP）組大鼠大腦缺血梗死體積明顯較手術（Model）組減少，假手術組（Sham）無梗死；b.H&E染色結果顯示假手術組大腦海馬解剖結構完整，飽滿，無明顯凋亡；RIP組細胞