基因水平Pin1-Wnt-β-catenin信號通路在CKD礦物質(zhì)代謝紊亂中的研究.pdf

1、目的：慢性腎臟疾?。–hronic Kidney Disease。CKD）嚴(yán)重威脅人類健康。礦物質(zhì)代謝紊亂是慢性腎臟病-礦物質(zhì)和骨代謝異常（Chronic kidney disease-mineral and bone disorder,CKD-MBD）的表現(xiàn)之一，其余表現(xiàn)還包括骨骼異常、心血管損害及軟組織鈣化等。CKD-MBD嚴(yán)重影響患者的預(yù)后及生活質(zhì)量，并且尚無有效的防治措施。維生素 D具有多種生理功能，其代謝紊亂參與多種疾病的病理

2、過程。CKD患者的維生素 D代謝情況日益受到關(guān)注，并且可能與wnt/β-catenin信號途徑相互作用。同時，最近的研究發(fā)現(xiàn)骨細(xì)胞特異性Wnt/β-catenin信號異常是造成CKD礦物質(zhì)骨代謝紊亂的原因之一，骨源性因子異常是CKD礦物質(zhì)代謝紊亂的重要機(jī)制。而CKD背景下出現(xiàn)的肽酰脯氨酰順/反異構(gòu)酶(Peptidyl-prolylcis/trans isomerase NIMA-interacting。Pin1)表達(dá)異常，可能通過改變W

3、nt/β-catenin信號的作用，參與CKD患者礦物質(zhì)、維生素D紊亂的進(jìn)展。因此，我們分析CKD患者維生素D狀態(tài)，了解影響其代謝紊亂的臨床因素。并且根據(jù)估算腎小球濾過率（estimated glomerular filtration rate,eGFR）對CKD患者進(jìn)行分期，通過檢測CKD患者Wnt/β-catenin通路中經(jīng)典標(biāo)志物β-catenin、Wnt1、SOST、DKK1以及Pin1和FGF23的mRNA變化，了解Pin1和

4、Wnt/β-catenin信號通路在CKD患者礦物質(zhì)和維生素代謝紊亂中的臨床意義，及可能影響其代謝紊亂的風(fēng)險因素。
　　方法：酶聯(lián)免疫吸附測定法檢測外周血25羥基維生素D（25hydroxy-vitamin D,25(OH)D）水平，比較不同分期間CKD患者25(OH)D的表達(dá)差異，并且分析影響25(OH)D代謝的臨床因素。同時分離CKD患者外周血單個核細(xì)胞（peripheral blood mononuclear cell,PB

5、MC），使用實時定量 PCR方法測定Pin1、β-catenin、Wnt1、SOST、DKK1、FGF23在PBMC中的表達(dá)，比較慢性腎臟病與正常健康對照組，以及CKD各期間mRNA表達(dá)的差異；分析Pin1和Wnt/β-catenin信號通路異常與慢性腎臟病礦物質(zhì)、維生素D等指標(biāo)的相關(guān)性。
　　結(jié)果：25(OH)D水平在CKD各期間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，并且與腎功能的進(jìn)展呈負(fù)相關(guān)。合并糖尿病、甲狀旁腺激素（parathyroid h

6、ormone,PTH）的水平和eGFR在維生素D不足和充足兩組間比較存在差異（P＜0.05），25(OH)D缺乏組往往表現(xiàn)為高PTH水平和較低的eGFR，并且在糖尿病患者中發(fā)生率較高。Pearson相關(guān)分析顯示入組患者血紅蛋白與25(OH)D水平呈正相關(guān)(r=0.342，P＜0.05)，logPTH與25(OH)D水平呈負(fù)相關(guān)(r=-0.460，P＜0.01)，年齡與25(OH)D水平呈負(fù)相關(guān)(r=-0.342，P＜0.05)，loge

7、GFR與25(OH)D水平呈正相關(guān)(r=0.594，P＜0.01)。多元線性回歸分析顯示，影響25(OH)D狀態(tài)的主要因素有年齡和PTH，具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。Pin1、β-catenin、SOST以及FGF23在CKD患者和正常對照PBMC中的表達(dá)具有顯著差異（P＜0.05），CKD患者均呈低表達(dá)。硬化蛋白(sclerostin)作為wnt/β-catenin信號通路的抑制劑，其基因SOST的表達(dá)量在CKD各期中存在顯著性差

8、異（P＜0.05），進(jìn)一步兩兩比較CKD1期和5期差異仍具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。Pin1與Wnt/β-catenin信號通路的相關(guān)性分析顯示，Pin1與β-catenin、Wnt1呈正相關(guān)（Pearson相關(guān)系數(shù)R=0.477。P=0.002；Spearman相關(guān)系數(shù)=0.314。P=0.046）。而mRNA水平與礦物質(zhì)等的相關(guān)性分析顯示，SOST與eGFR呈負(fù)相關(guān)（R=-0.362；P=0.020）；FGF23與PTH（R=0

9、.323；P=0.040）呈正相關(guān)。SOST和FGF23單獨或者聯(lián)合的ROC曲線分析結(jié)果無顯著統(tǒng)計學(xué)意義。在CKD1、2期eGFR較高的患者中以的低FGF23和低SOST分布為主（占CKD1、2期的75％）。CKD5期中，高FGF23高SOST組、低FGF23高SOST組以及低FGF23低SOST組的構(gòu)成比都較高，均在80%以上。高PTH血癥和低25(OH)D血癥的構(gòu)成比具有統(tǒng)計學(xué)差異（低FGF23和低SOST組明低于低FGF23高SO

10、ST組）。
　　結(jié)論：25(OH)D的水平在CKD患者早期就表現(xiàn)出不足，并且隨著腎功能的進(jìn)展逐漸降低。25(OH)D缺乏患者往往表現(xiàn)為高 PTH水平和較低的eGFR，并且在糖尿病患者中發(fā)生率較高。血紅蛋白、PTH、年齡和eGFR都是影響25(OH)D的因素。并且在校正了eGFR之后，年齡和PTH是影響維生素代謝的主要因素。Pin1、β-catenin、SOST以及FGF23在CKD患者中呈顯著低表達(dá)。SOST表達(dá)水平則隨著腎功能的

11、進(jìn)展逐漸升高，其余標(biāo)記物的趨勢性變化不顯著。且CKD患者Pin1和β-catenin、Wnt1間呈正相關(guān)，Pin1可能通過β-catenin調(diào)節(jié)wnt信號通路。SOST與eGFR呈負(fù)相關(guān)，F(xiàn)GF23和PTH呈正相關(guān)。SOST以及FGF23與CKD患者骨礦物質(zhì)代謝紊亂密切相關(guān)，但ROC曲線下面積分析二者單獨以及聯(lián)合診斷CKD-MBD尚無顯著統(tǒng)計學(xué)意義。CKD患者中FGF23和SOST較低者礦物質(zhì)以及維生素D代謝狀況較好，其eGFR較高，高