版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、多環(huán)芳烴(Polycyclic aromatic hydrocarbons,PAHs)是一類環(huán)境中廣泛存在的持久性有機污染物。隨著工業(yè)、海上石油運輸及海洋中石油開采業(yè)的迅速發(fā)展,PAHs對海洋環(huán)境造成的污染日趨嚴(yán)重,直接威脅著海洋生態(tài)系統(tǒng)的健康。海洋橈足類作為種類多、數(shù)量大、分布廣、在海洋生態(tài)系統(tǒng)中具有舉足輕重生態(tài)地位的一類海洋生物,也受到PAHs污染的直接威脅。由于橈足類具有生命周期短、個體小、對污染物敏感等特點,被認(rèn)為是一種理想的環(huán)
2、境污染指示生物,揭示橈足類對PAHs的響應(yīng)機理對于我國海洋環(huán)境監(jiān)測和健康評價具有十分重要的意義。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展,應(yīng)用轉(zhuǎn)錄組技術(shù)研究橈足類在分子水平上對PAHs的響應(yīng)機制,有望更加迅速、準(zhǔn)確地評價PAHs等污染的潛在威脅,具有重要的理論意義和應(yīng)用價值。但是由于海洋橈足類的個體小,一次性獲得轉(zhuǎn)錄組研究所需的足夠RNA比較困難,從而限制了分子生物學(xué)技術(shù)的應(yīng)用。本論文在用常規(guī)方法構(gòu)建了中國近海常見橈足類太平洋紡錘水蚤(Acartia
3、pcifica)cDNA文庫的基礎(chǔ)上,通過生物信息學(xué)分析獲得其功能基因的5',端共同序列(5'-commonsequence,5'-CS),并將5'-CS成功地用于哲水蚤目其它橈足類cDNA文庫的構(gòu)建。同時,利用該序列構(gòu)建了火腿偽鏢水蚤(Pseudodiaptomus poplesia)在PAHs脅迫下的抑制性消減文庫,篩選出一批對PAHs應(yīng)答的重要功能基因。最后,利用實時熒光定量PCR技術(shù)研究了相關(guān)功能基因在PAHs脅迫下的表達模式。
4、本研究為探索橈足類對污染物響應(yīng)的分子機制及應(yīng)用分子生物標(biāo)志物監(jiān)測海洋環(huán)境中的PAHs提供了理論依據(jù)和方法參考。主要內(nèi)容和結(jié)果如下:
(1)太平洋紡錘水蚤cDNA文庫構(gòu)建及5'端共同序列的獲取。利用GeneRacer法構(gòu)建了太平洋紡錘水蚤的全長cDNA文庫,并通過生物信息學(xué)分析獲得其功能基因mRNA5'端的共同序列(5'-Common Sequence,5'-CS)。
(2)哲水蚤目不同橈足類cDNA文庫的構(gòu)建。使用5
5、'-CS序列成功構(gòu)建了我國海洋常見橈足類(如,火腿偽鏢水蚤)的全長cDNA文庫,獲得了參與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、基因調(diào)控、物質(zhì)和能量代謝及物質(zhì)轉(zhuǎn)運等功能的基因cDNA序列。
(3)橈足類細(xì)胞質(zhì)核糖體蛋白基因分析。通過分析5'-CS-cDNA文庫并利用5,-CS序列進行簡并引物克隆,獲得了火腿偽鏢水蚤全套共79種細(xì)胞質(zhì)核糖體蛋白cDNA序列(32種小亞基蛋白和47種大亞基蛋白),并分析了其核酸及氨基酸序列特征:cDNA編碼區(qū)GC含量高于非翻
6、譯區(qū),3'-UTRs長度顯著大于5'-UTRs,具有顯著的物種密碼子偏好;推導(dǎo)的核糖體蛋白氨基酸序列中堿性氨基酸(Arg和Lys)含量最高;等電點較高,集中分布在10-12之間。
(4) PAHs(1,2-二甲基萘和芘)對火腿偽鏢水蚤的急性毒性。火腿偽鏢水蚤對PAHs較為敏感。在1,2-二甲基萘和芘暴露下,火腿偽鏢水蚤的96小時半致死濃度(96h-LC50)及95%置信區(qū)間分別為:788.98(681.93-912.82)μg
7、/L、54.68(47.88-62.45)μg/L。
(5)火腿偽鏢水蚤在PAHs脅迫下消減雜交文庫的構(gòu)建?;诨鹜葌午S水蚤的5'-CS序列,利用“生物素標(biāo)記-磁珠法”構(gòu)建1,2-二甲基萘和芘脅迫條件下的該橈足類全長cDNA消減文庫,首次獲得其對PAHs脅迫應(yīng)答的一系列功能基因全長cDNA序列,包括谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶(Glutathione S-transferasedelta-epsilon(GST(δ-ε))和Glutath
8、ione S-transferase theta(GST(θ)))、谷胱甘肽過氧化物酶(Phospholipid-hydroperoxide glutathione peroxidase(GPx4)和Glutathione peroxidase2(GPx2))、抗氧化蛋白(Peroxiredoxin6,Prdx6)、Ras-相關(guān)的C3肉毒桿菌底物蛋白1(Ras-related C3 botulinum toxin substrate1,
9、Rac1)等。
(6)火腿偽鏢水蚤重要功能基因在亞致死濃度PAHs(1,2-二甲基萘和芘)脅迫下的轉(zhuǎn)錄表達模式分析,研究結(jié)果如下:
?、賀PL15和RPS20可作為1,2-二甲基萘脅迫下火腿偽鏢水蚤的參考基因已RPL15和EF-1-delta可作為芘脅迫下火腿偽鏢水蚤的參考基因。
?、诓煌墓δ芑?,甚至屬于不同家族的同一功能基因的表達量在不同PAHs脅迫條件下表現(xiàn)出不同的變化規(guī)律已從本研究中7種功能基因響應(yīng)的
10、程度和敏感性上來看,火腿偽鏢水蚤對芘的脅迫相對與1,2-二甲基萘的脅迫更為敏感已根據(jù)短時間、低濃度的應(yīng)激反應(yīng),火腿偽鏢水蚤GST(δ-ε)、Prdx6基因可作為芘環(huán)境污染監(jiān)測的潛在生物標(biāo)志物。
③火腿偽鏢水蚤對芘的脅迫非常敏感。短時間(24h)、低濃度(96h-LC50的0.5%)暴露即會對本研究中的多數(shù)基因(GST(δ-ε)、GPx2、Prdx6、Rac1)產(chǎn)生顯著的誘導(dǎo)效應(yīng)。
?、蹽ST(δ-ε)基因在芘暴露24h
11、后表達量顯著增加,隨著暴露時間的增加,其表達量恢復(fù)到對照組水平,這一結(jié)果表明GST(δ-ε)基因在火腿偽鏢水蚤應(yīng)對芘脅迫的解毒過程中起著重要的作用,反應(yīng)十分迅速。
?、軵rdx6基因在芘暴露24h后表達量顯著上調(diào),且與暴露濃度正相關(guān),隨著暴露時間的增加,Prdx6表達量下調(diào)。結(jié)果表明在短時間的暴露下,火腿偽鏢水蚤可上調(diào)Prdx6基因的表達,以保護自身膜系統(tǒng)免受氧化應(yīng)激損傷,但隨著暴露時間和暴露濃度的增加,可能由于未得到及時清除的
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 海洋偽鏢水蚤(Pseudodiaptomus marinus Sato)培養(yǎng)及應(yīng)用的初步研究.pdf
- 塔瑪亞歷山大藻和火腿偽鏢水蚤對海洋酸化的生理學(xué)響應(yīng).pdf
- 鹽脅迫下旱柳cDNA文庫的構(gòu)建及耐鹽基因的篩選.pdf
- 鹽脅迫下甜瓜cDNA文庫構(gòu)建及NAC基因的功能分析.pdf
- 干出脅迫下孔石莼上調(diào)表達基因消減cDNA文庫的構(gòu)建與分析.pdf
- 利用抑制性差減雜交研究鎳脅迫下安氏偽鏢水蚤響應(yīng)的分子機理.pdf
- 小尾寒羊cDNA文庫的構(gòu)建及RPL23A基因表達的研究.pdf
- 鹽脅迫下紫桿檉柳cDNA文庫構(gòu)建及表達序列標(biāo)簽(EST)分析.pdf
- 長期多世代暴露下汞、鎘對海洋橈足類日本虎斑猛水蚤的毒性效應(yīng)及其機理研究.pdf
- 水稻灌漿初期高溫脅迫下的籽粒全長cDNA文庫構(gòu)建.pdf
- 棉花鹽脅迫誘導(dǎo)cDNA文庫的構(gòu)建及耐鹽基因的篩選與鑒定.pdf
- 山葡萄果皮cDNA文庫構(gòu)建及相關(guān)基因的克隆與表達.pdf
- 納米二氧化鈦對海洋橈足類日本虎斑猛水蚤的毒性效應(yīng)研究.pdf
- 人類肝臟cDNA文庫的構(gòu)建及hHGF基因的篩選、克隆與表達.pdf
- 鄂倫春馬cDNA文庫構(gòu)建及CCL2基因的克隆與表達研究.pdf
- 茶樹cDNA文庫的構(gòu)建及新梢特異表達基因EST序列分析.pdf
- 煙草全長cDNA文庫的構(gòu)建和LRR類受體蛋白激酶基因的克隆及表達分析.pdf
- 北京油雞cDNA文庫構(gòu)建及IL-18基因的克隆與表達研究.pdf
- 中國斗雞cDNA文庫的構(gòu)建及DJ-1和ANP基因的表達研究.pdf
- 60929.人突變apoe轉(zhuǎn)基因小鼠cdna文庫及削減文庫的構(gòu)建和基因表達特點的初步研究
評論
0/150
提交評論