miR-203通過TLR4調控白念珠菌刺激的樹突狀細胞合成IL-6和TNF-α.pdf

1、第一部分 單核源性樹突狀細胞接受熱滅活白念珠菌刺激后microRNA表達譜的改變：本部分實驗采用microRNA 芯片分析了接受熱滅活白念珠菌刺激后的單核源性樹突狀細胞microRNA表達譜的改變，并進行了生物信息學分析。結果表明：有62個microRNA在熱滅活白念珠菌刺激后表達上調，有4個microRNA在熱滅活白念珠菌刺激后表達下調。我們對表達發(fā)生變化的microRNA 進行了Gene Ontology、pathway、調控網(wǎng)絡和

2、轉錄因子分析，并結合文獻，從中挑選出miR-203作為研究對象。
　　 第二部分 miR-203 負向調控熱滅活白念珠菌誘導的單核源性樹突狀細胞表達IL-6和TNF-α:在本部分研究中，我們首先采用RT-PCR 法證實了芯片檢測結果，發(fā)現(xiàn)熱滅活白念珠菌可以通過TLR4，而非Dectin-1誘導單核源性樹突狀細胞表達miR-203。同時，我們還發(fā)現(xiàn)，熱滅活白念珠菌可以通過TLR4和Dectin-1誘導單核源性樹突狀細胞表達炎癥因子

3、IL-6和TNF-α。為研究熱滅活白念珠菌誘導單核源性樹突狀細胞表達miR-203的生物學意義，我們采用“gain-and loss-of-function”的研究手段，結果發(fā)現(xiàn)miR-203 可以負向調節(jié)IL-6和TNF-α的產(chǎn)生。這些結果表明：熱滅活變念珠菌誘導單核源性樹突狀細胞表達miR-203的生物學意義在于負向調控炎癥介質IL-6和TNF-α的產(chǎn)生，抑制炎癥反應的強度。
　　 第三部分TLR4是miR-203的作用靶點

4、:我們首先采用生物信息學軟件預測除了與白念珠菌免疫識別密切相關的模式識別受體TLR4是miR-203的作用靶點之一。然后我們通過報告基因技術，證實了TLR4 mRNA的3’UTR 可以與miR-203 發(fā)生相互作用。最后我們將miR-203 mimics和miR-203 inhibitor 轉染入單核源性樹突狀細胞，并采用熱滅活白念珠菌進行刺激。結果發(fā)現(xiàn)白念珠菌刺激單核源性樹突狀細胞可以引起其表面的TLR4表達逐漸降低，與miR-203

5、的變化趨勢剛好相反，而轉染miR-203 mimics 可以加速TLR4的表達下調，而轉染miR-203 inhibitor 則可以部分緩解TLR4的表達下調趨勢。這些結果表明：在單核源性樹突狀細胞中，TLR4是miR-203的作用靶點。
　　 第四部分 siRNA 沉默單核源性樹突狀細胞TLR4的表達:可以削弱熱滅活白念珠菌誘導TNF-α和IL-6表達的能力，但并不抑制miR-203的表達為研究樹突狀細胞中miR-203 抑制