水牛小腔卵泡的分離與小腔卵泡卵母細(xì)胞培養(yǎng)的初步研究.pdf

1、本研究主要通過探討水牛小腔卵泡分離的方法,并比較不同成熟培養(yǎng)液對(duì)水牛小腔卵泡卵母細(xì)胞體外培養(yǎng)效果的影響,以期建立有效的水牛小腔卵泡分離和小腔卵泡卵母細(xì)胞的體外培養(yǎng)體系。
　　 一、比較了不同的分離方法和酶作用的不同時(shí)間,以及不同的卵巢表面卵泡大小等因素對(duì)水牛小腔卵泡分離效果的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn):采用機(jī)械與酶結(jié)合的方法分離水牛小腔卵泡時(shí),平均每個(gè)卵巢獲得5.64個(gè)小腔卵泡,顯著高于機(jī)械法分離平均每個(gè)卵巢獲得的3.12個(gè)小腔卵泡數(shù)(P＜

2、0.05);當(dāng)膠原蛋白酶作用12min或15min時(shí),平均每個(gè)卵巢獲得的小腔卵泡數(shù)均顯著高于5min和10min處理組(P＜0.05),而12min與15min兩組之間沒有顯著差異(P＞0.05),但當(dāng)消化時(shí)間延長(zhǎng)到20min時(shí),卵泡膜被酶消化而破裂,沒法分離到小腔卵泡;從表面具有小于2mm卵泡且無黃體的卵巢分離獲得的小腔卵泡平均數(shù)顯著高于表面無可見卵泡且有黃體的卵巢組的平均數(shù)(7.50vs2.25,P＜0.05)。
　　 二、

3、研究了在成熟培養(yǎng)液中添加不同濃度的FSI-I、LH、Activin對(duì)水牛小腔卵母細(xì)胞體外成熟的影響。結(jié)果顯示:(1)當(dāng)LH濃度為0.5μg/mL時(shí),FSH添加濃度為2μg/mL的小腔卵泡卵母細(xì)胞體外成熟率(26.61±2.33％)和孤雌激活的囊胚發(fā)育率(2.75±1.00％)均顯著高于其他各組(0,0.3,0.5和3μg/mL)(P＜0.5);(2)當(dāng)FSH的濃度一定時(shí)(2μg/mL),隨著LH濃度的升高,水牛小腔卵泡卵母細(xì)胞體外成熟率

4、及激活后囊胚發(fā)育率也相應(yīng)提高,LH濃度為1μg/mL和2μg/mL時(shí),小腔卵泡卵母細(xì)胞體外培養(yǎng)的成熟率(33.98±1.33％和32.97±4.33％)及孤雌激活后的囊胚率(5.83±1.33％和4.40±0.33％)顯著高于對(duì)照組(17.35±0.33％和0％)和0.5μh/mL組(26.32±2.33％和2.11±0.33％)(P＜0.05),但兩組間無顯著差異(P＞0.05);(3)在培養(yǎng)液中,添加不同濃度的Activin對(duì)卵母細(xì)

5、胞的體外成熟率無顯著影響(P＞0.05),但添加濃度為100ng/mL(13.27±0.33％)和150ng/mL(9.64±2.33％)處理組卵母細(xì)胞激活后的囊胚率顯著高于0ng/mL(5.81±1.33％)和50ng/mL(6.52±2.33％)組(P＜0.05),而前兩組間差異不顯著(P＞0.05)。
　　 上述結(jié)果表明,采用酶與機(jī)械結(jié)合的方法,膠原蛋白酶濃度為3mg/L,消化12～15min最合適,且表面小于2mm可見卵