舒洛地特對(duì)高糖誘導(dǎo)下大鼠腹膜間皮細(xì)胞纖維化的作用.pdf

1、【目的】
　　 本課題旨在觀察舒洛地特(sulodexide, SLX)對(duì)高糖體外誘導(dǎo)大鼠腹膜間皮細(xì)胞(rat peritoneAlmesotheliAlcells, RPMCs)纖維化的作用，并探討SLX對(duì)高糖誘導(dǎo)下腹膜間皮細(xì)胞纖維化的可能作用機(jī)制。
　　 【方法】
　　 大鼠臟層腹膜胰酶消化法原代培養(yǎng)RPMCs，倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)、掃描電鏡及透射電鏡鑒定；通過(guò)四甲基偶氮唑藍(lán)(methylthiazol

2、y tetrazolium, MTT)試驗(yàn)確定SLX的安全劑量，第2代RPMCs用于實(shí)驗(yàn)，設(shè)為空白對(duì)照組、4.25％葡萄糖組、4.25％葡萄糖+低劑量SLX(50μg/ml)組、4.25％葡萄糖+中劑量SLX(400μg/ml)組、4.25％葡萄糖+高劑量SLX(800μg/ml)組。培養(yǎng)48h通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR)技術(shù)檢測(cè)

3、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(transforming growth factor-β1, TGF-β1)、Smad2、結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(connective tissue growth factor, CTGF)及α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(alpha smooth muscle actin, α-SMA)mRNA表達(dá)情況，采用免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測(cè)α-SMA蛋白表達(dá)情況，并通過(guò)積分光密度(integrated opticAldensity, IOD)測(cè)定進(jìn)行

4、半定量分析。所用實(shí)驗(yàn)至少重復(fù)3次。
　　 【結(jié)果】
　　 1.細(xì)胞鑒定：雙目倒置相差顯微鏡下，RPMCs為多角形細(xì)胞，呈鋪路石樣生長(zhǎng)。掃描電鏡下可見(jiàn)細(xì)胞表面存在大量的微絨毛。透射電鏡可見(jiàn)細(xì)胞漿內(nèi)有豐富的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體及高爾基小體，未見(jiàn)Weibel palade小體。
　　 2.細(xì)胞毒性試驗(yàn)：不同濃度SLX(0μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml、800μg/ml)干

5、預(yù)RPMCs 48 h后，各濃度之間細(xì)胞死亡率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，因此認(rèn)為本實(shí)驗(yàn)中舒洛地特劑量對(duì)RPMCs無(wú)毒性。
　　 3.與空白對(duì)照組相比，高糖刺激組RPMCs TGF-β1mRNA及Smad2 mRNA表達(dá)上調(diào)(P<0.05)，SLX可降低高糖條件下培養(yǎng)的RPMCs TGF-β1mRNA表達(dá)(P<0.05)，低劑量組和中、高劑量組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。中劑量組和高劑量組之間沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。

6、　　 4.RT-PCR結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組相比，高糖刺激組RPMCs CTGF mRNA及α-SMA mRNA表達(dá)上調(diào)(P<0.05)，SLX可降低高糖條件下培養(yǎng)RPMCs的CTGF mRNA及α-SMA mRNA表達(dá)(P<0.05)，低劑量組和中、高劑量組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。中劑量組和高劑量組之間沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　 5.免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組相比，高糖刺激組RPMCs α-SM

7、A蛋白表達(dá)上調(diào)(P<0.05)，SLX可降低高糖條件下培養(yǎng)的RPMCs α-SMA蛋白表達(dá)(P<0.05)，低劑量組和中、高劑量組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。中劑量組和高劑量組之間沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　 【結(jié)論】
　　 1.SLX在體外可明顯抑制高糖誘導(dǎo)的RPMCs TGF-β1、Smad2、CTGF的高表達(dá)。
　　 2.SLX在體外通過(guò)減輕高糖誘導(dǎo)的RPMCs向肌成纖維細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化，抑制腹