復(fù)方中藥連萸胃滯留滲透泵控釋制劑的設(shè)計與評價.pdf

1、左金方是經(jīng)典藥方，為黃連、吳茱萸(6:1)二藥配伍，其丸劑及膠囊劑為2010年版《中國藥典》收載品種，具有抑制胃酸分泌、抗?jié)儭⒖咕?、?zhèn)痛抗炎等藥理作用，臨床上常用來治療胃部炎癥及潰瘍性疾病。用生物熱動力學(xué)、抗幽門螺桿菌方法對左金方的藥效物質(zhì)進行了篩選研究證明主要活性物質(zhì)以黃連、吳茱萸總生物堿類為主。已有的藥代動力學(xué)研究表明，該類成分的體內(nèi)吸收很差，其作用基礎(chǔ)是在病變局部保持一定濃度才能發(fā)揮治療作用。左金方的普通制劑如丸劑或膠囊，口服后

2、會隨胃排空迅速進入腸道，不能在胃局部保持有效的濃度，因此治療效果不甚理想。
　　開發(fā)連萸胃滯留滲透泵控釋給藥系統(tǒng)，該制劑可顯著減少患者服用劑量，長時間滯留于胃液中，并具有明顯的零級釋藥特征，能夠使黃連與吳茱萸的有效部位在胃中持續(xù)定量釋放，可有效避免藥物的突釋效引起的刺激性，同時可使有效成分直達患處，可顯著提高療效和患者的依從性，使治療胃部炎癥及潰瘍性疾病獲得成功。
　　傳統(tǒng)骨架型胃漂浮緩釋制劑藥物的釋放與其溶解度有直接關(guān)系，

3、對于中藥復(fù)方多組分藥物，由于溶解度不同，難以保證各組分同步釋放。本研究制備連萸胃滯留滲透泵控釋片(LIFOPT)，由推動層與藥物層組成，其中推動層含有輕質(zhì)多孔微球，使片劑總表觀密度小于水，由于浮力作用，片子漂浮于胃液中，水分滲入藥物層形成軟膏狀藥物混懸液，推動層吸水膨脹，將藥物層推出釋藥孔。此種釋藥方式可保證藥物層各成分完全同步釋放，同時可獲得明顯的零級釋藥特征。
　　第一部分黃連與吳茱萸有效部位的提取分離純化
　　目的：采

4、用大孔樹脂吸附技術(shù)對黃連總生物堿進行有效分離純化并確定最佳工藝，采用中性氧化鋁柱色譜對吳茱萸中生物堿和檸檬苦素進行純化，并優(yōu)化其工藝。
　　方法：稱取黃連藥材1kg，粉碎成粗粉，加入12倍體積水，回流提取3次，每次2 h，合并提取液并濃縮至8 L，控制上樣生藥質(zhì)量濃度在0.10～0.15g/mL，采用AB-8大孔吸附樹脂分離，純化水洗脫雜質(zhì)3BV，50％乙醇洗脫生物堿3BV，減壓回收乙醇，真空干燥即得。黃連總生物堿的含量測定方法：

5、采用Diamonsil C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5μm)，乙腈-0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液(50:50)為流動相，檢測波長為345 nm。吳茱萸加入8倍量的70％乙醇，提取3次，每次2 h，濾過，合并濾液，濾液減壓回收乙醇至無醇味，加入24倍量的蒸餾水，然后用鹽酸調(diào)pH值至3。靜止放置2 h，在4500 r/min離心30 min，得下層沉淀。沉淀加入24倍藥材量的95％乙醇溶解后，減壓回收乙醇，浸膏加入適量中性

6、氧化鋁，少量甲醇，置60℃水浴中揮干甲醇，攪拌均勻，裝柱，醋酸乙酯-二氯甲烷(70:30)洗脫6BV，洗脫液減壓回收溶劑，真空干燥即得。吳茱萸中檸檬苦素、吳茱萸堿、吳茱萸次堿含量測定方法：采用DiamonsilC18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5μm)，乙腈-水-四氫呋喃-冰乙酸(41：59:1:0.2)為流動相，檢測波長為225 nm。
　　結(jié)果：黃連總生物堿的含量測定方法：巴馬汀、黃連堿在5～100μg/mL，小檗堿在

7、10.07-201.4μg/mL的濃度范圍內(nèi)與峰面積均呈良好的線性關(guān)系；平均回收率分別為9947％(RSD=1.29％)、99.73％(RSD=1.16％)、99.41％(RSD=0.99％)。黃連總生物堿平均轉(zhuǎn)移率91.72％，提取物中總生物堿平均含量81.87％，其中小檗堿、巴馬汀、黃連堿、表小檗堿平均含量分別為48.54％、13.25％、12.83％、7.26％。吳茱萸中檸檬苦素、吳茱萸堿、吳茱萸次堿含量測定方法：吳茱萸堿和吳茱萸

8、次堿在10～200μg/mL，檸檬苦素在25.27-505.4μg/mL的濃度范圍內(nèi)與峰面積均呈良好的線性關(guān)系；平均回收率分別為99.64％(RSD=1.46％)、98.90％(RSD=1.55％)、99.00％(RSD=1.10％)。吳茱萸中有效部位平均轉(zhuǎn)移率72.04％，提取物中有效部位平均含量56.45％，其中吳茱萸堿、吳茱萸次堿、檸檬苦素平均含量分別為8.73％、17.83％、30.18％。
　　結(jié)論：本實驗方法制備的黃連

9、與吳茱萸的提取物中的有效部位含量均大于50％，符合有效部位的要求。
　　第二部分精制中間體與左金丸的藥效學(xué)比較
　　目的：比較精制中間體與左金丸對抗大鼠實驗性胃潰瘍及胃酸分泌的作用，以此驗證提取工藝的合理性。
　　方法：考察不同劑量精制中間體與左金丸對吲哚美辛胃潰瘍的影響，以及對乙醇胃潰瘍的影響，并考察高劑量組精制中間體與左金丸對正常大鼠胃液分泌的影響。
　　結(jié)果：對吲哚美辛胃潰瘍的影響：精制中間體0.096、0

10、.135g/kg及左金丸1.05g/kg組的潰瘍數(shù)與對照組比較有顯著性差異。對乙醇胃潰瘍的影響：精制中間體0.135g/kg組及左金丸1.05g/kg組的潰瘍數(shù)均較對照組顯著為低。對正常大鼠胃液分泌的影響：精制中間體及左金丸均可顯著減少胃液分泌量和胃酸分泌。
　　結(jié)論：經(jīng)過主要藥效學(xué)指標對比表明，精制中間體與左金丸的藥效無顯著差異(p>0.05)，說明提取精制工藝合理。
　　第三部分連萸胃滯留滲透泵控釋片的制備
　　目

11、的：采用滲透泵制劑技術(shù)，制備連萸胃滯留滲透泵控釋片。
　　方法：連萸胃滯留滲透泵控釋片的制備方法：(1)輕質(zhì)多孔微球的制備：將聚丙烯酸樹脂RS溶于適量乙醇-二氯甲烷中，加入0.3％十二烷基硫酸鈉水溶液，50-100r/min攪拌，至油珠粒徑為0.3-0.8mm時，開始緩慢升溫，至40℃時固化4h，過濾，裝柱，10倍柱體積熱水淋洗后，干燥即得。(2)助推層的制備：將輕質(zhì)多孔微球、PEO、HPMC、氯化鈉、PVPk30按處方量混合均勻

12、，加入無水乙醇制軟材，過20目篩制粒，40℃干燥12h，加入硬脂酸鎂混勻。(3)含藥層的制備：將精制中間體、PEO按處方量混合均勻，加入無水乙醇制軟材，過20目篩制粒，40℃干燥12 h，加入硬脂酸鎂混勻。(4)壓片與包衣：用上述助推層與含藥層顆粒壓制雙層片芯后，用醋酸纖維素丙酮溶液包衣，在片劑的含藥層表面打一直徑0.8mm的小孔，即得。分別考察含藥層促滲劑種類及用量、助推層滲透劑用量、包衣液中致孔劑用量、釋藥孔直徑、片芯硬度對釋藥行為

13、的影響，含藥層助懸劑種類和用量對藥物混懸液流變性的影響，膨脹漂浮層膨脹劑材料對膨脹速度的影響，醋酸纖維素薄膜厚度對薄膜彈性模量及斷裂強度的影響，包衣液中致孔劑PEG400對醋酸纖維素(CA)膜水滲透速率的影響。在單因素考察的基礎(chǔ)上，以助推層膨脹劑及滲透劑的用量、包衣液致孔劑的用量作為考察因素，進行三因素三水平的正交設(shè)計優(yōu)化處方。測定不同滲透壓介質(zhì)中滲透泵片釋放度，驗證介質(zhì)滲透壓對藥物釋放的影響。
　　結(jié)果：根據(jù)單因素考察結(jié)果，含藥

14、層促滲劑為氯化鈉20mg，含藥層助懸劑為PEO(Mw，200，000)，用量為提取物：PEO=4:1助推層膨脹劑為PEO：HPMC=4:1，助推層滲透劑為氯化鈉，包衣膜厚度控制在0.18-0.20mm。根據(jù)正交試驗結(jié)果，助推層膨脹劑用量為50mg；助推層促滲劑的用量20mg；包衣液致孔劑的用量10％。以0.1 mol/L鹽酸溶液(加2mol/L氯化鈉)為釋放介質(zhì)，藥物釋放速率明顯下降，表明釋放的驅(qū)動力為釋放介質(zhì)與制劑內(nèi)部的滲透壓差。

15、r>　　結(jié)論：按優(yōu)化的處方與工藝制備的連萸胃滯留滲透泵片在12h內(nèi)藥物釋放大于90％，釋放曲線符合零級動力學(xué)方程，符合設(shè)計要求。
　　第四部分連萸胃滯留滲透泵控釋片體外釋放度研究
　　目的：建立HPLC法同時測定本制劑釋放介質(zhì)中的小檗堿、巴馬汀、吳茱萸堿、吳茱萸次堿，考察本制劑的釋放度并建立控制標準。
　　方法：HPLC方法：采用Diamonsil C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5μm)，乙睛-0.025

16、mol/L磷酸二氫鉀溶液(含20 mmol/L十二烷基磺酸鈉，磷酸調(diào)至pH3.5)(55:45)為流動相，檢測波長為225 mm，流速：1mL/min。釋放度測定方法：照釋放度測定法(附錄XD第一法)，采用溶出度測定法第二法裝置，以1000m10.1 mol/L鹽酸溶液為釋放介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為每min100轉(zhuǎn)，依法操作，經(jīng)2、4、6、8、10、12h分別取溶液2ml濾過，取續(xù)濾液測定即得。分別以0.1mol/L鹽酸溶液、水及磷酸鹽緩沖液(pH

17、6.8)為釋放介質(zhì)，照釋放度測定法進行測定，采用零級動力學(xué)方程對釋放度數(shù)據(jù)進行擬合。采用f2因子法評價四種成分的釋放曲線相似性。
　　結(jié)果：小檗堿在500.8-25.04μg/ml，巴馬汀為1.914-47.85μg/ml，吳茱萸堿與吳茱萸次堿在0.1023-2.046μg/ml的濃度范圍內(nèi)與峰面積均呈良好的線性關(guān)系；平均回收率分別為98.84％(RSD=1.51％)、99.17％(RSD=1.12％)、97.94％(RSD=1.

18、34％)、99.46％(RSD=1.05％)。在0.1mol/L鹽酸溶液、水及磷酸鹽緩沖液(pH6.8)釋放介質(zhì)中，小檗堿、巴馬汀、吳茱萸堿、吳茱萸次堿的釋放度數(shù)據(jù)用零級動力學(xué)方程進行擬合，所得各回歸方程r值均大于0.98，同時各成分的釋放曲線相比較，f2因子均大于50。
　　結(jié)論：利用HPLC法建立了同時測定本制劑中小檗堿、巴馬汀、吳茱萸堿、吳茱萸次堿釋放度方法，經(jīng)方法學(xué)驗證，精密度、準確性、穩(wěn)定性均符合要求，本制劑在各釋放介質(zhì)

19、中的釋放曲線均符合零級動力學(xué)方程，且各成分釋放曲線相似，表明本品可實現(xiàn)各成分以恒定速度同步釋放。
　　第五部分連萸胃滯留滲透泵控釋片Beagle犬體內(nèi)藥動學(xué)研究
　　目的：建立可同時測定Beagle犬血漿中小檗堿、巴馬汀的檢測方法，研究連萸胃滯留滲透泵控釋片中小檗堿與巴馬汀在Beagle犬體內(nèi)藥代動力學(xué)。
　　方法：Beagle犬隨機分成2組，采用雙周期交叉試驗，一組服用受試制劑連萸滲透泵片，另一組服用參比制劑連萸片，

20、劑量均為300mg。2周后進行交叉試驗。于口服給藥前(0 h)和給藥后1、2、3、4、6、8、、10、12、24、36、48、72、96、120h h取后肢靜脈血5ml，并立即移入肝素化離心管中，10000 r/min離心10 min，分離血漿，于-20℃冰箱中保存待測。色譜柱為Kromasil C18(250 mm×4.6 mm，5μm)，流動相：A為0.1％甲酸水溶液，B為0.1％甲酸乙腈溶液，梯度洗脫，檢測波長為345nm，流速：

21、1 mL/min。采用DAS軟件計算藥代動力學(xué)參數(shù)。
　　結(jié)果：小檗堿的線性范圍0.1～5.0μg/ml，日內(nèi)與日間RSD<15％，回收率84.16％～96.30％；巴馬汀線性范圍0.01～0.5μg/ml，日內(nèi)與日間RSD<15％，回收率81.05％～93.29％。Beagle犬口服參比制劑和受試制劑后的主要藥動學(xué)參數(shù)：小檗堿：tmax別為(3.890±1.524)h和(6.761±2.496)h，Cmax分別為(1.4073±

22、0.3804)μg/ml和(0.8773±0.2395)μg/ml，t1/2分別為(14.26±4.85)h和(18.33±6.39)h，AUC0～96分別為(35.94±8.86)μg·ml-1·h和(39.27±7.94)μg·ml-1·h，相對生物利用度為109.3±22.1％。巴馬汀：tmax分別為(4.191±1.527)h和(8.835±2.906)h，Cmax分別為(0.2515±0.0719)μg/ml和(0.1773±

23、0.0525)μg/ml，t1/2分別為(11.47±5.63h和(16.64±5.34)h，AUC0～96分別為(7.48±2.61)μg·ml-1·h和(8.54±2.39)μg·ml-1·h，相對生物利用度為114.2±31.9％。
　　結(jié)論：小檗堿、巴馬汀體內(nèi)血漿樣品測定靈敏度、精密度、準確度良好，線性范圍內(nèi)能滿足樣品的分析。以小檗堿、巴馬汀 AUC0～96計算，受試制劑與參比制劑相比生物利用度無顯著性差異，tmax明顯延