早衰小鼠P1型(SAMP1)胚胎干細(xì)胞的建系研究.pdf

1、自1981年小鼠胚胎干細(xì)胞成功建系以來,人們對胚胎干細(xì)胞的研究不斷深入：⑴胚胎干細(xì)胞已成為研究細(xì)胞分化、器官發(fā)生以及了解胚胎發(fā)育機制的有效手段；⑵對胚胎干細(xì)胞進(jìn)行基因操作有助于確定特定基因在發(fā)育、生理和病理過程中的作用；⑶成功建系人類疾病動物模型的胚胎干細(xì)胞,結(jié)合近年來興起的基因打靶(基因敲除或基因敲入)等生物技術(shù),可以研究人類高血壓、早衰等多種自發(fā)性疾病的發(fā)生機制,并對其治療和預(yù)防提供科學(xué)依據(jù)。胚胎干細(xì)胞建系是進(jìn)行所有這些研究的前提和

2、基礎(chǔ)。雖然胚胎干細(xì)胞建系技術(shù)已經(jīng)獲得了不斷的豐富和完善,但是二十多年以來能夠進(jìn)行生殖系傳代明確建系的種屬仍然僅限于小鼠有限的幾種品系,LIF加飼養(yǎng)層的有血清培養(yǎng)體系并不能通用于所有的小鼠及其他物種的胚胎干細(xì)胞建系工作。2008年華人科學(xué)家應(yīng)其龍博士領(lǐng)頭的研究小組基于“胚胎干細(xì)胞自我更新基態(tài)”理論利用2i小分子培養(yǎng)體系成功建立大鼠胚胎干細(xì)胞系為更多的小鼠品系甚至其它物種的胚胎干細(xì)胞建系工作帶來了全新的理論與技術(shù)支持。
　　 本文以

3、醫(yī)學(xué)研究熱點之一的老年性疾病的動物實驗?zāi)Ｐ驮缢バ∈驪1型即SAMPl小鼠作為研究對象,旨在通過應(yīng)用新型的添加小分子的無血清2i新型培養(yǎng)體系對分離的SAMP1小鼠囊胚的內(nèi)細(xì)胞團(ICM)進(jìn)行培養(yǎng)而獲得胚胎干細(xì)胞,成功建立SAMP1小鼠疾病動物模型的胚胎干細(xì)胞系。建立該疾病模型SAMPl小鼠胚胎干細(xì)胞系具有重大意義：①目前國內(nèi)外從未有過早衰小鼠模型胚胎干細(xì)胞成功建系的報道,應(yīng)用2i小分子培養(yǎng)體系建系成功很好的驗證了這種培養(yǎng)體系的通用型；②對

4、這種疾病模型小鼠胚胎干細(xì)胞的研究有助于人們清楚了解早衰的遺傳學(xué)特征,從而確定疾病相關(guān)基因,并實施基岡打靶等基因矯正技術(shù),根據(jù)過早衰老、老年性耳聾等相關(guān)疾病的發(fā)生機理有的放矢,對癥下藥,為這類疾病最終的治療和攻克奠定基礎(chǔ)。
　　 本實驗通過分離SAMP1小鼠囊胚內(nèi)細(xì)胞團(ICM)、對其進(jìn)行培養(yǎng)并對獲得的胚胎干細(xì)胞進(jìn)病毒感染,得出：⑴3.5d SAMP1小鼠囊胚可以在2i培養(yǎng)條件下自然孵化出內(nèi)細(xì)胞團(ICM),進(jìn)一步培養(yǎng)可獲得類胚胎