流產(chǎn)布氏桿菌S19株bp26基因標(biāo)記疫苗株的構(gòu)建及免疫原性初步研究.pdf

1、布氏桿菌病是一種在世界范圍內(nèi)廣泛流行并造成嚴(yán)重危害的人畜共患病，布氏桿菌是布氏桿菌病的病原體，它是一種胞內(nèi)寄生的革蘭氏陰性球桿菌，無芽抱，有莢膜，無鞭毛不能運(yùn)動(dòng)，不呈兩極染色。布氏桿菌病的特點(diǎn)是，一旦發(fā)病并轉(zhuǎn)入慢性就無法根治，因此，布氏桿菌病的預(yù)防對(duì)于控制布氏桿菌病是非常重要的，預(yù)防主要通過接我國(guó)目前使用比較廣泛的減毒活疫苗株有牛流產(chǎn)布氏桿菌S19 弱毒疫苗，馬耳他布氏桿菌M5 弱毒疫苗，以及豬布魯氏菌S2弱毒疫苗等。在這些疫苗株的使用

2、中還發(fā)現(xiàn)，它們具有交叉免疫保護(hù)效果，但是，也發(fā)現(xiàn)了一個(gè)比較嚴(yán)重的缺點(diǎn)，即減毒活疫苗在抗原上與強(qiáng)毒菌株沒有大的區(qū)別，而布氏桿菌病監(jiān)測(cè)和檢疫中主要采取基于S-LPS抗原“O”鏈特異性抗體而建立的免疫學(xué)方法，因此，無法區(qū)分是自然感染還是人工免疫，這就很難得出正確的監(jiān)測(cè)和檢疫的結(jié)果，給檢測(cè)和檢疫帶來很大的困難。
　　 如何解決現(xiàn)有疫苗的這以主要問題，對(duì)于布氏桿菌病的防控具有重要的意義。
　　 BP26蛋白是布氏桿菌的一個(gè)非常重要

3、的診斷抗原，已有很多用此抗原來進(jìn)行布氏桿菌診斷的報(bào)道。BP26 蛋白作為布氏桿菌的一個(gè)周質(zhì)蛋白，對(duì)布氏桿菌的毒力不起決定性的作用，但確是布氏桿菌的一個(gè)優(yōu)勢(shì)抗原，能夠誘導(dǎo)高滴度的抗體。BP26蛋白的這些特性，為我們進(jìn)行研究基因標(biāo)記疫苗研究提供了很好的靶標(biāo)。如果對(duì)該抗原進(jìn)行缺失標(biāo)記，將為鑒別診斷方法的建立提供標(biāo)識(shí)序列。
　　 因此，本項(xiàng)目擬利用同源重組的方法，對(duì)牛流產(chǎn)布氏桿菌S19弱毒疫苗進(jìn)行改造，構(gòu)建成bp26 基因缺失的標(biāo)記疫苗

4、株，命名為S19-△26。小鼠感染模型表明，標(biāo)記疫苗株S19-△26與親本株S19具有同樣的安全性，殘留毒力沒有因BP26 蛋白的缺失而發(fā)生改變，同時(shí)S19-△26免疫的小鼠一直沒有出現(xiàn)BP26 特異性抗體，為鑒別診斷提供可行性。在小鼠免疫保護(hù)試驗(yàn)中，S19-△26和S19接種的小鼠具有同樣抵抗S544強(qiáng)毒菌株攻擊的能力。S19-△26具備從血清學(xué)角度區(qū)分S19-△26免疫與野生型布氏桿菌感染，對(duì)布氏桿菌病防制、監(jiān)測(cè)及凈化具有重要的意義