柴胡疏肝湯對難治性癲癇大鼠癇性發(fā)作及多藥耐藥蛋白P-GP、MRP1表達的影響.pdf

1、背景:癲癇是一組由大腦神經(jīng)元反復(fù)異常同步化放電所引起的短暫中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能失常為特征的慢性腦部疾病。1997年WHO統(tǒng)計報告,癲癇的患病率在發(fā)達國家、經(jīng)濟轉(zhuǎn)軌國家、發(fā)展中國家和不發(fā)達國家分別為5.0‰、6.1‰、7.2‰、11.2‰,估計全球有約5000萬癲癇患者。據(jù)2000年國內(nèi)5省癲癇流行病學(xué)抽樣調(diào)查表明,我國癲癇患病率為7.0‰,活動性癲癇患病率為4.6‰,以此推算,全國約有活動性癲癇患者500-600萬。
　　 大多數(shù)的

2、癲癇患者經(jīng)過一段時間的規(guī)范藥物治療后,癇性發(fā)作可以得到控制。但是仍有一部分患者,藥物治療并不能夠減輕發(fā)作的頻率和強度,被稱為難治性癲癇(Refractory epilepsy,RE)。RE又稱頑固性癲癇,是指臨床經(jīng)過遷延,對抗癲癇藥物(AEDs)治療反應(yīng)差的一組癲癇病人,即3種一線藥物采用“最理想”的劑量單獨或合并使用2年以上仍有癲癇發(fā)作。目前RE的發(fā)病率約10％-20％,其病程長、反復(fù)發(fā)作、致殘率高,嚴重影響了患者的生活質(zhì)量,因此了解

3、RE的發(fā)生機制并尋找有效的治療方法十分必要。
　　 癲癇發(fā)病機制復(fù)雜。近年受到腫瘤多藥耐藥(multidrug resistance,MDR)機制的啟示,多藥轉(zhuǎn)運體在癲癇患者腦內(nèi)的表達受到關(guān)注,研究最深入的是P-GP、MRP1介導(dǎo)的MDR。這種蛋白的跨膜結(jié)構(gòu)具有能量依賴性“藥泵”的功能,它能將藥物和其它疏水性化合物主動轉(zhuǎn)運出細胞。大多數(shù)AEDs具有較高的脂溶性,可通過被動擴散通過血腦屏障,是P-GP和MRP1的天然底物,但若腦內(nèi)

4、蛋白表達增高,毛細血管內(nèi)皮細胞管腔側(cè)的P-GP和MRP1可將AEDs泵回血中,限制脂溶性藥物進入腦實質(zhì)。在RE中,由于P-GP和MRP1等蛋白的過量表達,參與了對多種抗癲癇藥物的轉(zhuǎn)運,降低了腦組織內(nèi)的血藥濃度,從而導(dǎo)致癲癇耐藥的出現(xiàn)。
　　 目前,PGP和MRP1的逆轉(zhuǎn)劑在RE的治療中受到重視。PGP的逆轉(zhuǎn)劑包括鈣通道阻滯劑、鈣調(diào)蛋白抑制劑、環(huán)孢菌素類、親脂性化合物及激素類等,MRP1的逆轉(zhuǎn)劑有丙磺舒、異黃酮等。逆轉(zhuǎn)劑的應(yīng)用無疑

5、是解決MDR的一種常用方法,但往往因為逆轉(zhuǎn)劑的毒性較強,副作用較大而影響其在臨床上的廣泛引用。癲癇的病機與肝的疏泄功能異常關(guān)系密切,其風(fēng)、痰、瘀產(chǎn)生均為肝氣失于疏泄、條達的病理變化,因而癲癇的論治可以選擇“從肝論治”。陳寶田教授重視癲癇“從肝論治”,運用柴胡疏肝湯治療RE,取得了較好療效。
　　 中醫(yī)藥對難治性癲癇具有確切的療效,可能有多途徑的綜合靶點作用,本研究以難治性癲癇大鼠模型作為中醫(yī)藥治療癲癇臨床研究的突破口,以多藥耐藥

6、蛋白P-GP、MRP1為切入點,探討中藥干預(yù)的可能機制。
　　 目的:本研究擬建立鋰-匹羅卡品難治性癲癇模型,觀察柴胡疏肝湯在改善癲癇大鼠癇性發(fā)作行為及腦電圖癇性波的效果,評價柴胡疏肝湯在保護神經(jīng)元以及抑制多藥耐藥蛋白P-GP、MRP1及上游基因mRNA表達的療效,探討難治性癲癇中醫(yī)“從肝論治”柴胡疏肝湯在治療中的機制,為癲癇的治療提供理論依據(jù)。
　　 方法
　　 1.難治性癲癇模型的建立采用氯化鋰-鹽酸匹羅卡品

7、的化學(xué)點燃方法制作模型。具體步驟:(1)先給予氯化鋰127mg/kg腹腔注射；(2)18-24h后腹腔注射阿托品1mg/kg；(3)30min后予10％匹羅卡品10mg/kg腹腔注射,30分鐘后若無Ⅳ級以上癇性發(fā)作,則每隔30min繼續(xù)腹腔注射匹羅卡品(10 mg/kg),直至大鼠出現(xiàn)癲癇持續(xù)狀態(tài)后停止注射。(4)癲癇持續(xù)狀態(tài)60分鐘,腹腔注射10％的水合氯醛(300mg/kg)終止發(fā)作。(5)癲癇持續(xù)狀態(tài)后的大鼠在經(jīng)過24h的急性期后

8、,進入10-15天左右的潛伏期；(6)15天后進入慢性期,開始篩選實驗動物,并以影像監(jiān)控系統(tǒng)進行連續(xù)監(jiān)測,檢測時間8AM-8PM,觀察時間為進入慢性期后4周(28天),若SE后大鼠在此時間內(nèi)出現(xiàn)自發(fā)性癇性發(fā)作,則為成功的慢性難治性癲癇模型。若無癇性自發(fā)發(fā)作,則棄用。
　　 2.柴胡疏肝湯對難治性癲癇模型癇性發(fā)作及腦電圖的影響將制備成功的60只難治性癲癇模型大鼠,隨機分為模型組、VPA組、柴胡疏肝湯低、中、高劑量組,每組12只,另

9、設(shè)空白對照組12只,實驗共設(shè)6組?？瞻讓φ战M和模型組常規(guī)飼養(yǎng),給予生理鹽水2ml/次灌胃,VPA組(德巴金)用量為200mg/kg/d,柴胡低、中、高劑量組依次為4.5g/kg/d,9g/kg/d,18g/kg/d,每日9am、6pm各給藥1次。各組大鼠均于慢性期后,統(tǒng)一灌胃治藥,連續(xù)給藥8周(56天)。視頻記錄大鼠慢性期4周、藥物治療4周、8周后癇性發(fā)作行為記錄,包括大鼠癇性發(fā)作次數(shù),平均持續(xù)時間,發(fā)作級別及各組大鼠體重的變化。于8周

10、治療結(jié)束后,以上每組隨機各取2只大鼠進行腦電圖描記。
　　 3.柴胡疏肝湯對癇性大鼠海馬和顳葉神經(jīng)元損傷的影響各組給藥后難治性癲癇模型大鼠30只,模型組、VPA組、柴胡疏肝湯低、中、高劑量組,每組各6只,另有空白對照組6只,共6組。腹主動脈灌注4％多聚甲醛的方法固定大鼠大腦,常規(guī)制備石蠟切片(含皮層和海馬)。HE染色觀察海馬各區(qū)及顎葉皮層神經(jīng)元形態(tài)結(jié)構(gòu)的改變,尼氏染色觀察海馬各區(qū)及顳葉皮層腦神經(jīng)元存活情況、尼氏小體丟失情況。

11、r>　　 4.柴胡疏肝湯對癇性大鼠腦內(nèi)多藥耐藥蛋白P-GP和MRP1及其上游基因的影響各組給藥后難治性癲癇模型大鼠30只,模型組、VPA組、柴胡疏肝湯低、中、高劑量組,每組各6只,另有空白對照組6只,共6組。通過免疫組化法、免疫印跡法、熒光定量PCR法檢測各組大鼠腦內(nèi)海馬和顳葉多藥耐藥蛋白P-GP和MRP1及其上游基因mRNA的表達。
　　 5.統(tǒng)計學(xué)方法數(shù)據(jù)用SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析,計量資料用均數(shù)±標準差(x±s

12、)表示。各組大鼠于不同用藥時間點發(fā)作次數(shù)、發(fā)作時間、體重變化比較,采用單個重復(fù)測量的方差分析進行統(tǒng)計分析,不同用藥組間比較采用單因素方差分析(One-way ANOVA)進行統(tǒng)計分析。各組大鼠癇性發(fā)作級別采用多組等級資料,對等級資料采用頻數(shù)進行統(tǒng)計描述,采用多個獨立樣本非參數(shù)檢驗Kruskal-Wallis法,尼氏小體數(shù)、免疫組化、免疫印跡法、熒光定量PCR采用單因素方差分析(One-way ANOVA)進行統(tǒng)計分析,P＜0.05為有統(tǒng)

13、計學(xué)意義。
　　 結(jié)果
　　 1.難治性癲癇模型的制備在實驗中,共對88只SD大鼠腹腔注射氯化鋰-鹽酸匹羅卡品,制備難治性癲癇模型。其中6只大鼠反復(fù)給予匹羅卡品,始終無法誘發(fā)出癲癇持續(xù)狀態(tài),棄用,其余82只大鼠在首次或追加匹羅卡品后開始出現(xiàn)癇性發(fā)作,并逐步達到SE。在急性期內(nèi)(24h)內(nèi),有9只大鼠因癲癇頻繁抽搐而死亡。在潛伏期內(nèi)(2周),因頻繁抽搐以及不能自主進食衰竭死亡共13只,多在SE后一周死亡,進入慢性期。在慢性

14、期4周,60只存活的的大鼠均出現(xiàn)自發(fā)發(fā)作,發(fā)作級別從Ⅰ級逐漸發(fā)展至Ⅴ級,慢性期內(nèi)無致癇大鼠死亡。
　　 2.柴胡疏肝湯對難治性癲癇模型癇性發(fā)作的影響
　　 2.1.各致癇組大鼠治療前后癇性發(fā)作次數(shù)的變化采用單個重復(fù)因素測量的方差分析,3個時間點差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=207.535,P=0.000),各組之間有統(tǒng)計學(xué)意義(F=2.755,P=0.037),各時間點與分組間有交互效應(yīng)(F=48.098,P=0.000)；用藥

15、前,各致癇組大鼠癇性發(fā)作次數(shù)無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)；用藥4周、用藥8周大鼠癇性發(fā)作次數(shù)均有差異(P＜0.05或P＜0.01)。組間多重比較,用藥4周后,與模型組相比,VPA、柴胡高劑量組均能減少大鼠癇性發(fā)作次數(shù),有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01或P＜0.05),柴胡低、中劑量與模型組無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05),但均與柴胡高劑量組有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；用藥8周后,與模型組相比,各組均能減少大鼠癇性發(fā)作的次數(shù),均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜

16、0.01),VPA、柴胡低、中劑量組與柴胡高劑量組均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01)。各組與治療前相比,模型組無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05),VPA、柴胡低、中、高劑量組差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。
　　 2.2.各致癇組大鼠治療前后癇性平均發(fā)作時間的變化采用單個重復(fù)因素測量的方差分析,3個時間點差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=182.683,P=0.000),各組之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=4.706,P=0.002),各

17、時間點與分組間有交互效應(yīng)(F=26.995,P=0.000)；用藥前,各致癇組大鼠癇性發(fā)作時間無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)；用藥4周、用藥8周大鼠癇性發(fā)作時間均有差異(P＜0.01)。組間多重比較,用藥4周后,與模型組相比,VPA、柴胡高劑量組均能減少癇性發(fā)作平均時間,有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01),柴胡低、中劑量與柴胡高劑量組均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01)；用藥8周后,與模型組相比,VPA、柴胡低、中、高劑量組均能減少大鼠

18、癇性發(fā)作平均時間,有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01),VPA、柴胡低、中劑量組與柴胡高劑量組均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01)。各組與治療前相比,模型組、柴胡低劑量組無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05),VPA、柴胡中、高劑量組差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。
　　 2.3.各致病組大鼠治療后癇性發(fā)作級別的比較采用非參數(shù)檢驗Kruskal-Wallis法,用藥前,各致癇組大鼠均表現(xiàn)Ⅳ級或Ⅴ級癇性發(fā)作,模型組、VPA

19、、柴胡低、中、高劑量組發(fā)作級別秩次分別為31.00、28.50、33.50、31.00、28.50,5組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(x2=0.919,P=0.922)；治療4周后,5組之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(x=12.945,P=0.012)；發(fā)作級別秩次分別為42.25、22.75、35.08、29.75、22.67,根據(jù)平均秩次推斷,柴胡高劑量組發(fā)作級別最低,VPA組次之,模型組最高。治療8周后,5組之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(x2=15.776

20、,P=0.003)；發(fā)作級別秩次分別為44.63、26.38、34.13、28.13、19.25,根據(jù)平均秩次推斷,以柴胡高劑量組發(fā)作級別最低,VPA組次之,模型組最高。
　　 3.各組大鼠治療前后體重的變化采用單個重復(fù)因素測量的方差分析,3個時間點大鼠體重差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=672.873,P=0.000),各組之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=203.671,P=0.000),各時間點與分組間有交互效應(yīng)(F=51.172,P=0.

21、000)；用藥前、用藥4周、用藥8周大鼠體重均有差異(P<0.01)。組間多重比較,給藥前,各致癇組大鼠與空白對照組大鼠之間均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01),各致癇組模型之間無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。治療4周后,各致癇組大鼠與空白對照組相比,均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；與模型組相比,VPA、柴胡中、高劑量組大鼠體重增加,有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；柴胡低、中劑量組與柴胡高劑量組均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。治療8周后,各致癇組

22、大鼠與空白對照組相比,均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；與模型組相比,VPA、柴胡低、中、高劑量組大鼠體重均增加,有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01),柴胡低、中劑量組與柴胡高劑量組均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。與治療前相比,除模型組無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)外,空白對照組、VPA、柴胡低、中、高劑量組均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。
　　 4.柴胡疏肝湯對難治性癲癇模型腦電圖的影響空白對照組大鼠腦電圖以基礎(chǔ)波即α,β波為主,無明顯節(jié)

23、律性；模型組大鼠出現(xiàn)大量高幅癇波,多為棘波、尖波、棘慢復(fù)合波,出現(xiàn)大量癇性放電；柴胡疏肝湯低、中劑量組大鼠均可見較多尖波、棘波、棘慢復(fù)合波,但波幅較模型組低。VPA組和柴胡疏肝湯高劑量組大鼠癇性放電明顯受到抑制,只見極少量棘波或尖波,而以柴胡疏肝湯高劑量組出現(xiàn)的最少。
　　 5.柴胡疏肝湯對難治性癲癇模型大鼠海馬和顳葉神經(jīng)元的影響
　　 5.1.HE染色結(jié)果,空白對照組大鼠海馬CA1區(qū)及齒狀回錐體細胞、顆粒細胞數(shù)量眾多,

24、胞漿透明,各區(qū)神經(jīng)元細胞核呈圓形或橢圓形,胞核藍染,核仁清晰,形態(tài)正常。模型組大鼠海馬錐體細胞、顆粒細胞排列較松散,各區(qū)可見細胞核固縮、碎裂,或胞核水腫、空泡。VPA組、中藥柴胡疏肝湯各劑量組的大鼠海馬神經(jīng)元細胞排列尚密集,可見部分細胞核固縮,或胞核水腫,神經(jīng)元損傷程度輕于模型組。
　　 5.2.尼氏(Nissl)染色結(jié)果,空白對照組大鼠海馬CA1、齒狀回見大量致密錐體細胞、顆粒細胞,各區(qū)神經(jīng)元細胞核呈圓形或橢圓形,胞核淡染,核

25、仁清晰,胞漿透明,尼氏小體豐富。模型組大鼠海馬錐體細胞、顆粒細胞排列松散,部分細胞核輪廓模糊,胞漿尼氏小體減少；VPA組、中藥柴胡疏肝湯各劑量組大鼠海馬仍有豐富的錐體細胞、顆粒細胞,各區(qū)細胞核輪廓尚清,胞漿尼氏小體有所減少,神經(jīng)元損傷程度較模型組輕。
　　 5.3.海馬CA1、DG區(qū)和顳葉皮層尼氏小體數(shù)的比較尼氏染色顯示,各組大鼠海馬CA1、DG區(qū)和顳葉皮層,尼氏小體數(shù)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。組間多重比較,空白對照組、

26、VPA組、柴胡高劑量組尼氏小體數(shù)高于模型組(P<0.01或P<0.05),柴胡低、中劑量組與模型組無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。柴胡高劑量組中尼氏小體數(shù)高于柴胡低、中劑量組(P<0.01或P<0.05)。但在DG區(qū),柴胡高劑量組與中劑量組無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　 6.柴胡疏肝湯對多藥耐藥蛋白P-GP及其上游基因MDR1mRNA的影響免疫組化檢測IOD值:各組大鼠海馬區(qū)CA1、DG和顳葉皮層區(qū),P-GP蛋白表達IOD值

27、有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。組間多重比較,CA1和DG區(qū),空白對照組、柴胡高劑量組低于B組(P<0.01),VPA組高于模型組(P<0.05或P<0.01)。柴胡高劑量組低于柴胡低、中劑量組(P<0.05或P<0.01),但高于空白對照組(P<0.05)。在顳葉皮層,空白對照組、柴胡高劑量組低于模型組(P<0.01),VPA、柴胡低、中劑量組與模型組相比無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。柴胡高劑量組低于VPA、柴胡低、中劑量組(P<0.0

28、1或P<0.05),與空白對照組相比無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　 免疫組化檢測陽性細胞數(shù):各組大鼠海馬CA1、DG區(qū)和顳葉皮層區(qū),免疫組化檢測P-GP蛋白表達的陽性細胞數(shù)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。組間多重比較,VPA組高于模型組(P<0.05或P<0.01),空白對照組、柴胡高劑量組低于模型組(P<0.05或P<0.01)。柴胡高劑量組低于柴胡低劑量組(P<0.05),與空白對照組、柴胡中劑量組無統(tǒng)計學(xué)意義(P>

29、0.05)。
　　 Western Blotting檢測蛋白:各組大鼠海馬、顳葉皮質(zhì)區(qū)蛋白表達有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。組間多重比較,海馬區(qū),VPA組高于模型組(P<0.05),空白對照組、柴胡各劑量組均低于模型組(P<0.05或P<0.01)。柴胡高劑量組低于柴胡低、中劑量組(P<0.05或P<0.01),但高于空白對照組(P<0.01)；顳葉皮質(zhì)區(qū),VPA組與模型組無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),空白對照組、柴胡中、高劑量

30、組低于模型組(P<0.01)。柴胡高劑量組低于柴胡低、中劑量組(P<0.05或P<0.01),與空白對照組無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　 熒光定量PCR法檢測上游基因MDR1 mRNA的表達:各組大鼠海馬、顳葉皮質(zhì)區(qū),MDR1-mRNA表達有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。組間多重比較顯示,VPA組表達高于模型組(P<0.01),空白對照組、柴胡高劑量組表達低于模型組(P<0.05或P<0.01),柴胡低、中劑量組表達與模型組

31、無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。柴胡高劑量組表達高于空白對照組組(P<0.05),在海馬區(qū),柴胡高劑量組表達低于柴胡低、中劑量組(P<0.05或P<0.01)。
　　 7.柴胡疏肝湯對多藥耐藥相關(guān)蛋白MRP1及其上游基因mRNA的影響免疫組化檢測IOD值:各組大鼠海馬CA1、DG區(qū)和顳葉皮層區(qū),MRP1蛋白表達有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。多重比較,在CA1區(qū),VPA組高于模型組(P<0.05),空白對照組、柴胡高劑量組低于模型組

32、(P<0.01)。柴胡高劑量組低于柴胡低劑量組(P<0.05),與空白對照組、柴胡中劑量組相比無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。在DG區(qū),VPA組高于模型組(P<0.01),空白對照組、柴胡高劑量組低于模型組(P<0.01)。柴胡高劑量組低于柴胡低、中劑量組(P<0.01),但高于空白對照組(P<0.01)。在顳葉皮層區(qū),VPA、柴胡低、中劑量組與模型組相比無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),空白對照組、柴胡高劑量組低于模型組(P<0.01)。柴

33、胡高劑量組低于柴胡低、中劑量組(P<0.05),但高于空白對照組(P<0.05)。
　　 免疫組化檢測陽性細胞數(shù):各組大鼠海馬CA1、DG區(qū)和顳葉皮層區(qū),MRP1蛋白表達有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。多重比較,空白對照組、柴胡高劑量組低于模型組(P<0.05或P<0.01),VPA組高于模型組(P<0.05),柴胡高劑量組低于柴胡低劑量組(P<0.05或P<0.01),與空白對照組、柴胡中劑量組無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。在D

34、G區(qū),VPA組與模型組無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　 Western Blotting檢測蛋白表達:各組大鼠海馬、顳葉皮質(zhì)區(qū)蛋白表達有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。多重比較,VPA、柴胡低劑量組與模型組無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),空白對照組、柴胡中、高劑量組低于模型組(P<0.05或P<0.01)。柴胡高劑量組低于柴胡低、中劑量組(P<0.05或P<0.01)。在海馬區(qū),柴胡高劑量組高于空白對照組(P<0.01)。

35、　　 熒光定量PCR法檢測上游基因MRP1 mRNA的表達:各組大鼠海馬、顳葉皮質(zhì)區(qū),MRP1-mRNA表達有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。多重比較,海馬區(qū),VPA組表達高于模型組(P<0.05),空白對照組、柴胡高劑量組表達低于模型組(P<0.05或P<0.01),柴胡低、中劑量組表達與模型組無統(tǒng)計學(xué)意義。柴胡高劑量組表達低于柴胡低劑量組(P<0.05),與空白對照組、柴胡中劑量組無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。顳葉皮質(zhì)區(qū),VPA組表達

36、高于模型組(P<0.01),空白對照組、柴胡中、高劑量組表達低于模型組(P<0.05或P<0.01),柴胡低劑量組表達與模型組無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。柴胡高劑量組表達與柴胡低、中劑量組無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),但高于空白對照組(P<0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.本研究成功建立了鋰-匹羅卡品癲癇持續(xù)狀態(tài)后慢性難治性癲癇模型,操作相對簡單、成功率較高、穩(wěn)定性較好,為后續(xù)實驗打下了較好的基礎(chǔ)。
　　

37、2.柴胡疏肝湯有較好的抗癲癇作用,可以減少難治性癲癇模型大鼠的癇性發(fā)作次,減少平均發(fā)作時間,減輕發(fā)作級別,并可改善癇性大鼠的整體狀態(tài),增加大鼠的體重,且存在一定的量效、時效依賴性。
　　 3.通過HE染色和尼氏染色證實,柴胡疏肝湯可以減輕癇性大鼠腦內(nèi)海馬CA1、齒狀回以及顳葉神經(jīng)元的損傷,減少尼氏小體的損失。
　　 4.中藥復(fù)方柴胡疏肝湯具有一定的抑制P-GP、MRP1的藥物轉(zhuǎn)運體功能,可以下調(diào)P-GP、MRP1的表達。