夫西地酸與磷霉素對MRSA生物被膜感染聯(lián)合效應(yīng)研究.pdf

1、目的：研究夫西地酸與磷霉素聯(lián)用對196株MRSA聯(lián)合抗菌效應(yīng)。研究夫西地酸與磷霉素聯(lián)用對體外MRSA生物被膜的作用.研究夫西地酸與磷霉素聯(lián)用對燙傷合并MRSA生物被膜感染的大鼠的作用。研究夫西地酸與磷霉素聯(lián)用對鈷60照射后燙傷合并MRSA生物被膜感染的大鼠的作用。
　　 方法：⑴采用棋盤法設(shè)計,微量肉湯稀釋法測定不同濃度組合的夫西地酸與磷霉素對196 MRSA的最低抑菌濃度,并計算FIC指數(shù)、判定聯(lián)合效應(yīng),采用掃描電鏡、原子力顯

2、微鏡觀察MRSA的形態(tài)。⑵采用改良的組織培養(yǎng)平板法建立體外MRSA BBF模型,銀染法及活菌計數(shù)法初步鑒定BBF的形成,采用活菌計數(shù)法、掃描電鏡(SEM)觀察測定時間差療法夫西地酸與磷霉素對體外MRSA BBF的作用。⑶建立燙傷合并MRSA生物被膜感染的大鼠模型,通過對大鼠的生命體征、血常規(guī)、感染部位BBF菌落計數(shù)的測定以及運用掃描電鏡觀察等方法研究磷霉素與夫西地酸聯(lián)合對燙傷合并MRSA生物被膜感染的大鼠的作用。⑷建立60Co照射后免疫

3、力低下燙傷合并MRSA生物被膜感染的大鼠模型。通過對大鼠的生命體征、血常規(guī)、感染部位BBF菌落計數(shù)測定；對大鼠骨髓病理,皮膚病理觀察以及對IL-6、CRP測定等評價磷霉素與夫西地酸聯(lián)用對免疫力低下的MRSA生物被膜感染的大鼠的作用。
　　 結(jié)果：①夫西地酸與磷霉素聯(lián)用對196株MRSA藥敏實驗結(jié)果表明:夫西地酸和磷霉素聯(lián)合應(yīng)用,FIC指數(shù)分布172株為≦0.5,協(xié)同百分比為87.76％)；24株表現(xiàn)無關(guān)作用(12.24％)；無拮

4、抗作用.表明夫西地酸與磷霉素聯(lián)用對多數(shù)MRSA呈協(xié)同作用。②銀染法快速鑒定濃密的黑染交織分布的物質(zhì)為BBF的形成；活菌計數(shù)法測定硅膠片生物被膜菌落數(shù).建立24h未成熟的生物被膜的模型,連續(xù)給藥3天；建立7天成熟的生物被膜的模型,連續(xù)給藥5天后,各個給藥組都能減少MRSA體外BBF內(nèi)活菌數(shù)量.夫西地酸聯(lián)合磷霉素(16/256μg/ml)比單用夫西地酸(16μg/ml)、單用磷霉素(256μg/ml)對MRSA BBF的作用差異有統(tǒng)計學(xué)意義

5、(p<0.05),減少大于100倍,兩者聯(lián)用比單用協(xié)同作用.掃描電鏡能夠觀察模型組形成的致密的MRSABBF,可以看到大片的球狀細菌形成菌落堆積在一起,細菌相互粘連聚集度高.夫西地酸與磷霉素聯(lián)用后未見粘連的小團塊聚集狀,少量散在的球狀MRSA,少量細菌出現(xiàn)變形.夫西地酸與磷霉素聯(lián)合用藥的效果要優(yōu)于單用藥。③成功建立燙傷合并MRSA生物被膜感染的大鼠模型。造模7天時,模型組大鼠白細胞、單核細胞、中性粒細胞的值遠遠高于正常對照組；造模14天

6、時,磷霉素組、夫西地酸與磷霉素聯(lián)用組大鼠白細胞、單核細胞、中心粒細胞明顯低于造模大鼠組.夫西地酸與磷霉素聯(lián)用組BBF下活菌計數(shù)低于磷霉素組100倍,降低了2個數(shù)量級的菌落,提示兩者聯(lián)用有協(xié)同殺滅MRSABBF下細菌的作用。掃描電鏡下觀察燙傷合并MRSA BBF感染大鼠生物被膜為緊密包繞聚集成團,細菌與細菌之間以粘稠的粘液絲相連,細菌表面凹凸不平的模樣物質(zhì)；夫西地酸和磷霉素組掃描電鏡觀察生物被膜形態(tài),BBF密度低于磷霉素單用組,其中僅有少

7、量變形的細菌。④成功建立了鈷60照射致免疫功能低下合并燙傷后MRSA生物被膜感染的大鼠模型.大鼠在造模3天時白細胞降到了最低,造模第七天時,大鼠的白細胞低于正常組.夫西地酸與磷霉素聯(lián)合給藥組的BBF下活菌數(shù)明顯低于磷霉素單用組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05),減少大于100倍,兩者聯(lián)用有協(xié)同作用。在給藥7天后模型組的CRP,IL-6值遠遠高于其他三組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05).夫西地酸與磷霉素聯(lián)用組大鼠的CRP、IL-6值與正

8、常組接近。造模7天和14天大鼠骨髓腔均有出血,部分細胞造血功能受損。造模7天和14天大鼠皮膚可見大量的中性粒細胞浸潤和細菌菌落。磷霉素組中性粒細胞變形,數(shù)量減少。夫西地酸與磷霉素聯(lián)合用藥組比磷霉素單用組的皮膚中中性粒細胞浸潤明顯減少。鈷60照射免疫力低下的燙傷大鼠皮膚MRSA生物被膜感染可被夫西地酸和磷霉素聯(lián)合用藥所抑制。
　　 結(jié)論：夫西地酸與磷霉素聯(lián)用對體外MRSA浮游菌主要為協(xié)同作用。夫西地酸與磷霉素聯(lián)合對體外體內(nèi)MRSA