人工合成肽IDR-1018對MRSA生物被膜影響的研究.pdf

1、目的:
　　1.測定耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）的生長曲線及 MRSA生物被膜生長曲線，指導后期實驗中對細菌接種時間及紅霉素應用濃度的把握。
　　2.構建MRSA體外生物被膜模型。
　　3.探究不同濃度 IDR-1018與紅霉素對 MRSA成熟生物被膜的破壞作用以及對MRSA生物被膜形成的抑制作用。
　　方法:
　　1.挑取單菌落于5ml TSB培養(yǎng)基中，37℃震蕩培養(yǎng)16h后，將細菌懸液按1:10

2、00接種于TSB培養(yǎng)基中，每2h取出200μl菌懸液于595nm處測量吸光度值，得到細菌生長曲線。
　　2.建立生物被膜模型。以聚氯乙烯（PVC）材質的96孔板作為細菌的粘附載體，以TSB為液體培養(yǎng)基，將對數(shù)后期細菌懸液濃度調整至108CFU/ml后接種于載體上，37℃靜置培養(yǎng)，以結晶紫染色法觀察生物被膜狀態(tài)。
　　3.將 IDR-1018/紅霉素工作液（1000mg/L）于96孔板中經二倍稀釋法稀釋為一系列不同濃度梯度的藥

3、液備用。
　　4.細菌接種24h、48h后給予不同濃度的IDR-1018和（或）紅霉素干預，繼續(xù)37℃靜置培養(yǎng)，以結晶紫染色法觀察生物被膜狀態(tài)，生理鹽水清洗后加入乙醇溶解，于595nm處測量吸光度值。
　　結果:
　　1.細菌接種至液體培養(yǎng)基中后，2～4h為生長適應期，從第4h起已開始進入對數(shù)生長期，持續(xù)16h，隨后細菌開始進入生長穩(wěn)定期。
　　2. PVC96孔板經結晶紫染色可見孔壁氣液交界處一層紫色連續(xù)性片狀

4、生物被膜。
　　3.細菌接種48h后給予不同濃度IDR-1018或紅霉素干預，觀察到各濃度組的IDR-1018對成熟生物被膜產生了明顯的破壞作用；高濃度組（1g/L~250mg/L）的紅霉素可對成熟生物被膜起到破壞作用，低濃度組（<250mg/L）對生物被膜的破壞作用不明顯。
　　4.細菌接種24h后給予 IDR-1018或紅霉素干預，觀察到各個濃度組 IDR-1018對生物被膜形成產生了明顯的抑制作用，高濃度分組（1g/L

5、~250mg/L）的紅霉素可抑制未成熟生物被膜的形成，低濃度分組（<250mg/L）對生物被膜的抑制作用不明顯。
　　5.聯(lián)合應用IDR-1018和紅霉素后，在低藥物濃度下（均為15mg/L）兩者聯(lián)合應用即可產生較強的抑制生物被膜的作用。
　　結論:
　　1. IDR-1018能有效破壞已經形成的MRSA生物被膜，即使在較低濃度下仍有作用；紅霉素在高濃度時有破壞生物被膜的作用，隨著濃度降低，其效果明顯減弱。