Treg細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子—Foxp3基因多態(tài)性與中國(guó)漢族人群Graves病的相關(guān)性研究.pdf

1、第一部分 Graves病患者131I治療前后Treg和Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)及臨床意義
　　目的：了解Graves?。℅raves’ disease GD）患者131I治療前后外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）中Th17及Treg細(xì)胞相關(guān)的細(xì)胞因子表達(dá)水平的變化，探討其在GD發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的作用。
　　方法：通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR方法分別檢測(cè)45例GD患者131I治療前、后及40例正常人外周血PBMC中Foxp3、I

2、L-17、IL-23、IL-27和IFN-γ在mRNA水平的表達(dá)變化。通過(guò)化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)GD患者甲狀腺功能水平，并利用SPSS17.0對(duì)其與細(xì)胞因子的表達(dá)水平進(jìn)行相關(guān)性分析。
　　結(jié)果：131I治療前，初診GD患者（T0組）PBMC中Foxp3的表達(dá)明顯降低（P<0.0001），IL-17、IL-23、 IL-27和IFN-γ的表達(dá)明顯高于正常對(duì)照組（P<0.0001）。131I治療一月后（T1組）Foxp3的表達(dá)比T0組有所回升

3、（P=0.0391），但仍低于對(duì)照組（P=0.0150）；IL-17、IL-23、IL-27比T0組均有一定程度的下降（P<0.05）但仍高于對(duì)照組(P<0.001)；IFN-γ趨于正常水平，與對(duì)照組無(wú)明顯差異（P=0.3945）。相關(guān)性分析得出，F(xiàn)oxp3與FT3、FT4、TRAb呈負(fù)相關(guān)，同時(shí)Foxp3與IL-17的表達(dá)亦呈負(fù)相關(guān)性；IL-17、IL-23與FT3、FT4均呈正相關(guān)；TRAb與IL-23和IL-27的表達(dá)水平呈正相關(guān)

4、。
　　結(jié)論：Treg及Th17相關(guān)的細(xì)胞因子在GD的發(fā)生、發(fā)展中有著重要的作用，131I治療可通過(guò)影響其細(xì)胞因子的表達(dá)起到治療GD的作用。
　　第二部分 Treg細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子—Foxp3基因多態(tài)性與中國(guó)漢族人群GD易感性的相關(guān)性研究
　　目的：探討 Foxp3基因啟動(dòng)子中-2383、-3279、-3499和非編碼區(qū) IVS9+459共4個(gè)SNP位點(diǎn)與中國(guó)漢族人群GD的易感性。
　　方法：收集308名GD患者和3

5、06名健康體檢者作為對(duì)照，提取外周血，運(yùn)用PCR-RFLP的方法檢測(cè)Foxp3基因4個(gè)SNP位點(diǎn)的基因型，計(jì)算基因型與等位基因頻率。同時(shí)用在線SHEsis統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)SNP位點(diǎn)進(jìn)行連鎖不平衡分析和單倍體型分析。
　　結(jié)果：-3279位點(diǎn)，AA/CA基因型在GD患者中的頻率顯著高于對(duì)照組（36.4％ vs26.5%, P=0.008），等位基因A的頻率也明顯增高（21.4% vs15.0%, P=0.004）。同時(shí)AA/CA基因型在

6、女性GD中的頻率高于男性GD患者。在IVS9+459位點(diǎn)上，基因型CC的頻率在GD中明顯升高（P=0.006，OR=2.781，95%CI：1.332-6.187）。-2383位點(diǎn)和-3499位點(diǎn)的基因型和等位基因頻率在GD患者和健康對(duì)照中沒(méi)有明顯的區(qū)別。我們對(duì)Foxp3基因啟動(dòng)子區(qū)中3個(gè)SNP位點(diǎn)進(jìn)行單倍體型分析發(fā)現(xiàn)，CCA、CAA和TCA三個(gè)單體型在GD和對(duì)照組中的分布存在著明顯的差異（P<0.0001, P=0.0008和P<0.

7、0001）。CAA和TCA單體型在GD患者中的頻率較高，增加GD的患病風(fēng)險(xiǎn)（16.5%vs10.2%, OR=1.777,95% CI1.266-2.494和6.5% vs1.7%, OR=3.979,95% CI2.001-7.913）；而CCA單體型可降低GD的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)（54.1% vs65.4%, OR=0.610,95%CI0.478-0.778）。
　　結(jié)論：中國(guó)漢族人群GD的易感性與-3279位點(diǎn)和IVS9+459位點(diǎn)

8、的基因多態(tài)性相關(guān)，與-2383和-3499位點(diǎn)無(wú)關(guān)。CAA和TCA單體型單體型為GD的風(fēng)險(xiǎn)因子，增加GD的易感性，而CCA單體型可作為一個(gè)保護(hù)性因子降低GD的易感性。
　　第三部分 Foxp3基因SNP在GD患者中引起的功能性變化研究
　　目的：介于Foxp3基因多態(tài)性與GD的易感性相關(guān)，本次研究主要是為了探討Foxp3基因中的SNP在GD患者中所引起的功能性變化。
　　方法：采用PCR和定向克隆技術(shù)，將不同單倍體型C

9、CA和CAA的Foxp3基因啟動(dòng)子序列克隆到pGL3-Basic載體中，轉(zhuǎn)染293T和HeLa細(xì)胞后檢測(cè)啟動(dòng)子活性的變化。實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)不同基因型的GD患者Foxp3基因的表達(dá)水平，同時(shí)利用生化分析儀檢測(cè)不同基因型GD患者甲狀腺功能及自身抗體水平的差異。
　　結(jié)果：在-3279位點(diǎn)，攜帶AA/CA基因型的GD患者的Foxp3基因相對(duì)表達(dá)水平明顯低于攜帶CC基因型的GD患者（P=0.004）。攜帶-3279位點(diǎn)CA基因型的G

10、D病患者的血清FT3的水平明顯低于攜帶CC或者AA基因型的GD患者（P=0.045，P=0.018）。此外，攜帶-3279位點(diǎn)A等位基因的GD患者血清TSH水平升高，而TRAb的水平降低（P=0.014，P=0.017）。攜帶-2383位點(diǎn)TT基因型的GD患者的血清FT3水平較高（P=0.032，P=0.021），攜帶-3499位點(diǎn)A等位基因的GD患者的血清TGAb水平明顯升高（P=0.029）。另外，在293T和HeLa兩種細(xì)胞系中，