肝癌細胞系中氧化還原能力調控與腫瘤干細胞特性間的相互作用及機制研究.pdf

1、目的：
　　本文目的是研究肝臟腫瘤細胞調控氧化應激的機制及腫瘤干細胞在抗氧化應激過程中的作用，探尋參與調節(jié)腫瘤干性特征與抗氧化應激過程的相交叉的分子靶點，并人為干預后，進一步對比肝臟腫瘤細胞抗氧化應激能力及干性特征的變化。從而從腫瘤干細胞具有較強抗氧化應激能力的生物學特性角度為腫瘤的臨床治療、基礎研究及新藥研發(fā)提供新的策略與思路。
　　方法：
　　1.對比肝細胞癌(HCC)細胞系Huh7與SMMC-7721對外源性RO

2、S(H2O2)抵抗能力及兩組細胞系中參與ROS調控的相關分子表達差異，探究肝癌細胞對ROS抵抗的初步機制;2.進一步分離Huh7細胞中抗ROS的亞群，并與普通Huh7細胞比較抗ROS能力及調控ROS代謝的相關分子表達的差異，篩選出調節(jié)通路中的關鍵分子(β-catenin);3.使用β-catenin阻滯劑XAV939阻斷Wnt/β-catenin信號通路，觀察Huh7細胞抗ROS能力的變化;4.通過慢病毒干擾Huh7細胞系內ROS產生基

3、因Nox1，人為減少細胞內ROS的產生，來比較Nox1基因干擾組與GFP（綠色熒光）對照組細胞抗ROS能力、干性特征及相關分子表達的變化，進而探究ROS調控能力與腫瘤干性特征之間的關系。
　　結果：
　　1.經(jīng)H2O2作用后，相對于SMMC-7721細胞，Huh7細胞凋亡壞死數(shù)目更少，活性更強，細胞內ROS水平更低，同時相對高表達干性分子CD133、bmi-1，DNA修復基因Rad51、ROS清除酶基因SOD2。2.肝癌細胞

4、Huh7內存在具有較強抗ROS能力的亞群（Huh7-ROS），該亞群細胞相對于普通的Huh7細胞高表達bmi-1、CD133、Bcl-2、SOD1，并且在經(jīng)H2O2作用后，凋亡壞死數(shù)目更少，活性更強，細胞內ROS水平更低。3.相對于未用XAV939處理的Huh7細胞，經(jīng)XAV939處理的Huh7-XAV939組細胞在H2O2作用后，細胞凋亡壞死數(shù)目更多，活性更低，細胞內ROS水平更高，而在不使用H2O2情況下即H2O2濃度為0umol/

5、ml時，Huh7細胞的凋亡和壞死及細胞活性都沒有差異。4.干擾Huh7細胞內ROS產生基因Nox1的實驗組細胞（Huh7-siNox1），相對于普通的對照組綠色熒光細胞(Huh7-GFP)，不但在H2O2作用后細胞活性更高，而且還有更強體內致瘤能力、集落形成能力。
　　結論：
　　1.肝癌細胞擁有較強的抗ROS的能力有賴于腫瘤干性分子、DNA修復基因及清除酶基因的共同作用。2.肝癌細胞內存在抗ROS的亞群細胞，這一亞群也同時

6、高表達腫瘤干性分子、ROS清除酶基因、DNA修復基因以及腫瘤干細胞信號通路分子β-catenin基因。3.β-catenin基因調控腫瘤細胞的自我更新等干性細胞學特性，在腫瘤細胞抗ROS過程中同樣發(fā)揮作用。XAV939作為β-catenin基因的特異性阻滯劑，可以在不會誘導細胞凋亡和壞死的濃度水平抑制肝臟腫瘤細胞調控ROS抵抗的能力，進而可增加化療藥殺傷腫瘤細胞的效應，其有可能成為化療“增敏劑”，進而在化療過程中起到輔助作用。4.通過干