查爾酮類似物及其還原產(chǎn)物的合成與體外抗氧化活性的研究.pdf

1、研究背景：
　　據(jù)報(bào)道，查爾酮類化合物由于其分子結(jié)構(gòu)具有柔性,能與不同的受體結(jié)合,因此具有抗腫瘤、抑制和清除氧自由基、抗菌、抗病毒、抗?jié)兒徒獐d等多種生物活性。文獻(xiàn)報(bào)道，查爾酮還原產(chǎn)物1，3-二苯基丙烯醇類化合物在抗腫瘤、抗炎及HIV-1整合酶抑制劑等方面活性不如查爾酮，但專門研究查爾酮的還原產(chǎn)物1,3-二苯基丙烯醇的活性報(bào)道卻很少見(jiàn)。本實(shí)驗(yàn)合成了16個(gè)查爾酮類似物,并選擇性還原部分化合物的羰基，得到12個(gè)對(duì)應(yīng)的查爾酮還原產(chǎn)物，即

2、1,3-二苯基丙烯醇類化合物,并對(duì)它們進(jìn)行體外清除DPPH·自由基和ABTS·+自由基實(shí)驗(yàn)。將通過(guò)體外清除DPPH·自由基和ABTS·+自由基實(shí)驗(yàn)篩選出活性最好的藥物進(jìn)行細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，試圖發(fā)現(xiàn)查爾酮類化合物及其還原產(chǎn)物抗氧化活性的構(gòu)效關(guān)系以及具有優(yōu)良抗氧化活性的新結(jié)構(gòu)。
　　研究目的：
　　發(fā)現(xiàn)查爾酮類化合物及其還原產(chǎn)物的抗氧化活性構(gòu)效關(guān)系以及具有優(yōu)良抗氧化活性的新結(jié)構(gòu)。
　　研究方法：
　?、俸铣刹糠?br>　　以

3、苯甲醛類似物和苯乙酮類似物為原料，通過(guò)Claissen-Schmidt反應(yīng)得到查爾酮類似物；用硼氫化鈉還原查爾酮類似物，得到1，3-二苯基丙烯醇類化合物。
　?、谒幚聿糠?br>　　1、采用DPPH（1,1-二苯基苦基苯肼）法測(cè)定所合成藥物清除DPPH·自由基的活性。
　　2、采用ABTS（2,2-聯(lián)氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二銨鹽）法測(cè)定所合成藥物清除ABTS·+自由基的活性，篩選出體外活性最好的3種化合物。<

4、br>　　3、采用細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察和MTT法測(cè)定細(xì)胞存活率作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，建立H2O2誘導(dǎo)PC12細(xì)胞氧化損傷的模型。
　　4、采用細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察和MTT法測(cè)定細(xì)胞存活率作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，評(píng)價(jià)經(jīng)DPPH和ABTS法篩選出的體外活性最好的3種化合物11a，11b和13a對(duì)H2O2誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞氧化損傷模型的保護(hù)作用。
　　5、采用總超氧化物歧化酶（T-SOD）羥胺法，谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-PX）法和丙二醛（MDA）法，評(píng)價(jià)經(jīng)

5、DPPH和ABTS法篩選出的體外活性最好的3種化合物11a，11b和13a對(duì)H2O2誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞內(nèi)MDA含量，SOD和GSH-PX活性的影響。
　　研究結(jié)果：
　?、俸铣刹糠?br>　　合成出28個(gè)查爾酮類似物及1，3-二苯基丙烯醇類化合物，部分結(jié)構(gòu)經(jīng)IR、1H-NMR、MS分析確證。
　　②藥理部分
　　1、通過(guò)所合成藥物對(duì)體外抗DPPH·自由基活性的大小比較中，在一系列查爾酮衍生物中，9a、10a、11

6、a、13a、14a、15a和16a抗DPPH·自由基的活性大小與陽(yáng)性藥VC相比，都無(wú)顯著性差異（P>0.05），其中11a和13a抗DPPH·自由基的活性最好；在一系列查爾酮還原產(chǎn)物即1，3-二苯基丙烯醇類化合物中，9b、10b、11b、13b、14b和15抗DPPH·自由基的活性大小與陽(yáng)性藥VC相比，都無(wú)顯著性差異（P>0.05），其中11b和13b的抗DPPH·自由基的活性最好。
　　2、通過(guò)所合成藥物對(duì)體外抗ABTS·+自由

7、基活性的大小比較中，在一系列查爾酮衍生物中，9a、10a、11a、13a、14a、15a和16a抗ABTS·+自由基的活性大小與陽(yáng)性藥VC相比，都無(wú)顯著性差異（P>0.05），其中11a和13a抗ABTS·+自由基的活性最好；在一系列查爾酮還原產(chǎn)物即1，3-二苯基丙烯醇類化合物中，9b、10b、11b、13b、14b和15b抗ABTS·+自由基的活性大小與陽(yáng)性藥VC相比，都無(wú)顯著性差異（P>0.05），其中11b和13b的抗ABTS·+

8、自由基的活性最好。
　　3、H2O2可使PC12細(xì)胞數(shù)量逐漸減少，多數(shù)細(xì)胞突起收回，胞體變圓，部分變圓細(xì)胞成團(tuán)存在，胞體邊緣模糊，折光性減弱，貼壁能力降低；與正常組比較，400μmol/L的H2O2誘導(dǎo)PC12細(xì)胞存活率在57％左右的損傷（P<0.05），故氧化損傷PC12細(xì)胞的H2O2適宜濃度為400μmol/L。
　　4、11a、11b和13a在100μmol/L給藥濃度下對(duì)400μmol/L H2O2誘導(dǎo)PC12細(xì)胞損

9、傷的形態(tài)改善實(shí)驗(yàn)中，13a對(duì)細(xì)胞形態(tài)的改善作用最為明顯。細(xì)胞存活率檢測(cè)結(jié)果：與正常組比較，400μmol/LH2O2損傷PC12細(xì)胞1h后的模型組細(xì)胞存活率為57.1%（P<0.05）；與模型組比較，11a和13a在給藥濃度為100μmol/L時(shí)分別提高細(xì)胞存活率23.4個(gè)百分點(diǎn)和35.7個(gè)百分點(diǎn)（P<0.05），而11b在給藥濃度為100μmol/L時(shí)無(wú)顯著提高細(xì)胞存活率的作用。
　　5、11a、11b和13a對(duì)H2O2誘導(dǎo)的P

10、C12細(xì)胞內(nèi)MDA含量、和細(xì)胞內(nèi)SOD和GSH-PX的活性測(cè)試結(jié)果表明，與模型組比較，11a（100μmol/L）和13a（100μmol/L）受試物組對(duì)降低細(xì)胞內(nèi)MDA含量的趨勢(shì)明顯（P<0.05），11a（100μmol/L）和13a（100μmol/L）受試物組對(duì)提高細(xì)胞內(nèi)的T-SOD活性和GSH-PX活性差異都非常明顯（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　?、偻晟埔徊椒ê铣刹闋柾愃莆锛捌溥€原產(chǎn)物的方法。②發(fā)現(xiàn)各化合物清

11、除DPPH·自由基的活性與清除ABTS·+自由基的活性大小排序基本一致，這表明，查爾酮類似物及其還原產(chǎn)物對(duì)兩種自由基可能有著相同的清除機(jī)理。③發(fā)現(xiàn)化合物以下構(gòu)效關(guān)系：化合物抗自由基活性的大小與查爾酮4位酚羥基鄰位取代基的類型密切相關(guān)：鄰位取代若為給電子基團(tuán)，活性明顯增強(qiáng)；鄰位取代若為吸電子基團(tuán)，則活性明顯減弱；且查爾酮4位酚羥基兩側(cè)鄰位取代的取代基效應(yīng)也通常具有疊加性。④化合物11a、13a具有優(yōu)良的抗H2O2氧化損傷的作用，13a的抗