HPLC-Q-TOF串聯(lián)質(zhì)譜法研究FAK蛋白抑制劑的體外代謝產(chǎn)物和代謝途徑.pdf

1、藥物的代謝產(chǎn)物分析是生命科學(xué)以及醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的熱點(diǎn)研究?jī)?nèi)容之一，研究藥物的代謝產(chǎn)物有助于候選藥物的篩選，提高用藥安全性，降低候選藥物的淘汰率為新藥開(kāi)發(fā)提供思路。高效液相色譜-質(zhì)譜及串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用的方法（HPLC-MS和HPLC MS/MS）是目前代謝組學(xué)最常用和最主要的方法之一，以其高分辨率和強(qiáng)大的定性分析能力等優(yōu)勢(shì)逐漸成為研究藥物代謝產(chǎn)物及代謝轉(zhuǎn)化途徑的強(qiáng)有力工具，廣泛地應(yīng)用于代謝物的結(jié)構(gòu)檢測(cè)和代謝途徑推導(dǎo)。高分辨質(zhì)譜準(zhǔn)確質(zhì)量的MS、MS/

2、MS檢測(cè)和靈敏度高的特點(diǎn)提供了較高的代謝物結(jié)構(gòu)識(shí)別和確認(rèn)能力。
　　我們采用分子對(duì)接方法(Molecular docking)對(duì)FAK抑制劑化合物的藥物活性進(jìn)行了初步篩選，對(duì)其構(gòu)效關(guān)系進(jìn)行了初步的評(píng)估研究。通過(guò)藥物的分子結(jié)構(gòu)特征利用物化參數(shù)、拓?fù)鋮?shù)、結(jié)構(gòu)參數(shù)完成定量，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)藥物的生物活性的定量。這種設(shè)計(jì)思路可以概括為首先利用選擇活性已知的小分子，分析相關(guān)的定量構(gòu)效關(guān)系，進(jìn)一步設(shè)計(jì)其他的藥物，最后對(duì)設(shè)計(jì)出的藥物進(jìn)行評(píng)價(jià)。本實(shí)驗(yàn)選

3、擇FAK為受體蛋白，即生物靶點(diǎn)分子，它的三維晶體結(jié)構(gòu)通常是由相關(guān)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)庫(kù)提供的X單晶衍射法。FAK小分子抑制劑藥物與受體部位結(jié)合，發(fā)揮藥理作用，同時(shí)獲得與藥物結(jié)合位點(diǎn)的信息。利用計(jì)算機(jī)分子模擬技術(shù)研究采集的參數(shù)，如結(jié)合位點(diǎn)的靜電場(chǎng)，整體構(gòu)象，氫鍵，疏水作用等，在化合物數(shù)據(jù)庫(kù)中篩選出目標(biāo)化合物，進(jìn)行藥物體外代謝實(shí)驗(yàn)。
　　本文采用采用高效液相色譜和高分辨四極桿—飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜(HPLC-QTOF-MS/MS)技術(shù)對(duì)FAK三

4、種抑制劑 PF03814735、PF562271和PF573228體外肝微粒體的代謝產(chǎn)物進(jìn)行了結(jié)構(gòu)鑒定，推測(cè)了各抑制劑藥物經(jīng)肝微粒體體外I相代謝的主要代謝反應(yīng)途徑。本文通過(guò)實(shí)驗(yàn)獲得精確質(zhì)量數(shù)、同位素分布、二級(jí)質(zhì)譜圖特征碎片離子等信息，鑒定了代謝物的結(jié)構(gòu)。通過(guò) MS/MS特征離子碎片信息，對(duì)比原藥M0與代謝物M1、M2、M3的結(jié)構(gòu)差異，以及代謝產(chǎn)物的MS/MS譜圖與原藥M0的MS/MS進(jìn)行對(duì)比，推導(dǎo)藥物生物轉(zhuǎn)化的部位，推測(cè)代謝途徑。該工作