JNK-FoxO1-puma信號通路調(diào)控氧化應(yīng)激引起的卵巢顆粒細胞凋亡.pdf

1、大量實驗表明，氧化應(yīng)激引起的卵巢顆粒細胞凋亡是雌性動物體內(nèi)卵泡閉鎖的主要原因。研究氧化應(yīng)激條件下卵巢顆粒細胞凋亡的調(diào)控機制，可以為治療動物卵泡異常閉鎖及不孕提供完整的理論依據(jù)和藥物靶點。Forkhead box protein O轉(zhuǎn)錄因子(FoxO)是Fox家族中研究最深入的O亞家族成員，它參與了細胞的增殖、DNA損傷修復、凋亡、分化、代謝等過程。
　　本實驗室前期研究表明氧化應(yīng)激下FoxO1在顆粒細胞凋亡中表達量顯著上升，然而F

2、oxO1如何發(fā)揮調(diào)控機制尚不清楚。本文旨在探討氧化應(yīng)激條件下，F(xiàn)oxO1表達與核定位特點以及對下游基因調(diào)控作用。通過對雙氧水處理的氧化應(yīng)激引起體外培養(yǎng)小鼠卵巢顆粒細胞模型研究，我們發(fā)現(xiàn)C-Jun氨基末端激酶（C-Jun NH2-Terminal Kinase，JNK）活性隨著雙氧水濃度的變化而顯著升高。而本實驗室前期研究表明FoxO1參與了卵巢顆粒細胞的凋亡。由此我們推測JNK參與了FoxO1介導氧化應(yīng)激引起的顆粒細胞凋亡。當通過向細胞

3、培養(yǎng)液中添加JNK的抑制劑抑制JNK活性時，TUNEL熒光染色結(jié)果表明卵巢顆粒細胞的凋亡率顯著下降。利用免疫熒光技術(shù)，我們發(fā)現(xiàn)JNK作為一種應(yīng)激活化蛋白激酶可調(diào)控FoxO1轉(zhuǎn)錄因子的核定位。進一步實驗發(fā)現(xiàn)，氧化應(yīng)激處理顆粒細胞，可導致細胞內(nèi)FoxO1進入細胞核后mRNA水平和蛋白水平顯著升高。通過熒光素酶報告系統(tǒng)質(zhì)粒的構(gòu)建，我們發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)oxO1具有啟動自身轉(zhuǎn)錄的功能，它可以結(jié)合到自身基因的啟動子上啟動轉(zhuǎn)錄，從而放大自身調(diào)節(jié)作用。本研究還