超聲微泡介導(dǎo)MCD-microRNA干擾質(zhì)粒對(duì)大鼠心肌梗死后心功能的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景：心肌梗死是導(dǎo)致心力衰竭的重要原因，改善心肌梗死后心功能不全具有重要意義，現(xiàn)有的研究認(rèn)為心肌能量代謝障礙在心衰的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮重要作用。目前大多數(shù)研究認(rèn)為抑制脂肪酸氧化或增加葡萄糖氧化，將有助于改善心臟功能。大量的研究證實(shí)超聲微泡介導(dǎo)外源基因在大鼠心肌中具有較強(qiáng)的靶向運(yùn)載能力，并且不會(huì)導(dǎo)致不可逆的心肌損傷和影響心功能。
　　本項(xiàng)研究旨在構(gòu)建并篩選MLYCD基因microRNA干擾質(zhì)粒，并將其與脂質(zhì)微泡混合，在體外超聲介導(dǎo)下

2、，靶向心肌梗死wistar大鼠心肌釋放MCD-microRNA干擾質(zhì)粒，通過(guò)沉默心肌MLYCD基因，提高丙二酰輔酶A的含量，抑制脂肪酸的氧化，觀察其對(duì)心功能的影響及其可能存在的機(jī)制，為從代謝治療心功能不全提供新的靶點(diǎn)。包括以下二個(gè)部分。
　　第一部分 MLYCD基因microRNA干擾質(zhì)粒的篩選及在體外干擾效應(yīng)的初步研究
　　目的：在體外觀察大鼠MLYCD基因microRNA干擾質(zhì)粒對(duì)MLNCD基因的抑制作用。
　　方

3、法：構(gòu)建大鼠MLYCD基因microRNA干擾質(zhì)粒和大鼠MLYCD基因的真核表達(dá)質(zhì)粒，將二者共轉(zhuǎn)染至HEK293細(xì)胞中，提取細(xì)胞總RNA，用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)MLYCD基因mRNA表達(dá)水平，篩選最佳microRNA干擾序列。
　　結(jié)果：DNA測(cè)序表明針對(duì)大鼠MLYCD基因的microRNA干擾質(zhì)粒和MLYCD基因的真核表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建成功。實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果表明干擾組1(MCD-microRNA-1)mRNA表達(dá)顯著低于陰性對(duì)

4、照組，陽(yáng)性對(duì)照組和其他干擾組(P<0.05)。
　　結(jié)論：MCD-microRNA-1為最佳干擾序列，為后續(xù)研究奠定了基礎(chǔ)。
　　第二部分超聲微泡介導(dǎo)MCD-microRNA抑制心肌MOD對(duì)心肌梗死后大鼠心功能的影響
　　目的：探討通過(guò)超聲微泡介導(dǎo)MCD-microRNA干擾質(zhì)粒，靶向抑制心肌丙二酰輔酶A脫羧酶(MCD)后對(duì)心肌梗死后大鼠心功能的影響及其可能的機(jī)制。
　　方法：通過(guò)永久性結(jié)扎大鼠左冠狀動(dòng)脈前降支構(gòu)

5、建心肌梗死模型，將28只心肌梗死大鼠隨機(jī)分配到心肌梗死+生理鹽水組(n=7)，心肌梗死+質(zhì)粒組(n=7)，心肌梗死+超聲+質(zhì)粒組(n=7)，心肌梗死+超聲+微泡+質(zhì)粒組(n=7)，另取7只假手術(shù)+生理鹽水組作為對(duì)照。將篩選好的干擾質(zhì)粒與脂質(zhì)微泡混合，通過(guò)超聲介導(dǎo)轉(zhuǎn)染入心肌梗死后4周大鼠中，每4天轉(zhuǎn)染一次，連續(xù)轉(zhuǎn)染28天后通過(guò)超聲心動(dòng)圖觀察左室射血分?jǐn)?shù)(LVEF％)，短軸收縮率(FS％)，左室舒張末期內(nèi)徑大小(LVIDd)的變化，采用酶聯(lián)

6、免疫法檢測(cè)乳酸的變化。
　　結(jié)果：心肌梗死+超聲+微泡+質(zhì)粒組LVEF％，F(xiàn)S％高于其他心肌梗死干預(yù)組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，但明顯低于假手術(shù)+生理鹽水組(P<0.05)，乳酸低于其他心肌梗死干預(yù)組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，但明顯高于假手術(shù)+生理鹽水組(P<0.05)。LVIDd各心肌梗死干預(yù)組無(wú)顯著差異(P>0.05)，但明顯低于假手術(shù)+生理鹽水組(P<0.05)。
　　結(jié)論：超聲微泡介導(dǎo)MC