對蝦中隱蔽態(tài)T-2毒素危害特征與免疫毒性分子標記識別.pdf

1、T-2毒素是真菌的次級代謝物，常見于谷類農(nóng)作物。被T-2污染的農(nóng)作物，無論是被人類直接攝入還是被制成動物飼料都能進入食物鏈中。T-2能在動物的不同部位代謝并蓄積，并通過動物的肌肉、牛奶或者蛋進入食物鏈給人類帶來潛在的健康危害。
　　本研究從凡納濱對蝦生長指標、消化酶和病理組織學分析T-2毒素對凡納濱對蝦的損傷效應(yīng)。結(jié)果顯示，T-2毒素對凡納濱對蝦特定增長率影響顯著(p＜0.05），從總體看，隨著T-2濃度的增加，腸道的蛋白酶、淀粉

2、酶和肝胰腺脂肪酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶的活力下降。肝胰腺的蛋白酶、淀粉酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶以及腸道脂肪酶分別在0.5、0.5-4.8、0.5-1.2、0.5-4.8mg·kg-1之間酶活力增高，在高劑量則酶活力下降。根據(jù)T-2劑量與各指標之間的劑量-效應(yīng)曲線分析，得到T-2誘導(dǎo)腸道蛋白酶活力的NOAEL值(0.48mg·kg-1)和EC50(1.28mg·kg-1)最小，說明在消化酶中腸道蛋白酶對T-2最敏感，其可以作為T-2對凡納濱對蝦消化系統(tǒng)損傷的

3、標志性指標之一。從對蝦的肝胰腺、腸道和肌肉的顯微結(jié)構(gòu)可以看出，T-2能對對蝦的不同部位產(chǎn)生嚴重損傷作用并具有劑量依賴性，則T-2毒素能引起凡納濱對蝦增長緩慢，消化酶活力下降以及組織發(fā)生病變。
　　通過對蝦血液和肝胰腺中不同非特異性免疫指標的測定結(jié)果顯示，血清白蛋白含量、溶菌酶和抗菌活力與T-2的劑量呈負相關(guān)，其中血清白蛋白含量下降顯著(p＜0.05)可作為衡量T-2對凡納濱對蝦產(chǎn)生毒性作用的生物學標志之一，根據(jù)T-2劑量與血清白蛋

4、白濃度之間的劑量-效應(yīng)曲線分析得出T-2的EC50是1.28mg·kg-1，但是無NOAEL值。血清總蛋白含量、凝集力、溶血活力、酸性磷酸酶以及肝胰腺酸性磷酸酶分別在0.5-4.8、1.2-2.4、0.5、0.5-4.8、0.5-1.2mg·kg-1之間產(chǎn)生免疫刺激作用，在高劑量有免疫抑制現(xiàn)象。肝胰腺中ATP酶表達混亂，細胞內(nèi)的離子調(diào)節(jié)失衡。說明，T-2損傷凡納濱對蝦的免疫系統(tǒng)，大部分測定指標出現(xiàn)低劑量刺激，高劑量抑制的現(xiàn)象。
　

5、　通過不同劑量染毒對蝦經(jīng)檢測沒有游離態(tài)T-2然后給小鼠灌胃分析小鼠的增重率和器官系數(shù)、血常規(guī)指標、血清生化指標和遺傳毒性指標，分析對蝦中T-2及隱蔽態(tài)殘留物對小鼠的毒性作用。結(jié)果表明，低劑量染毒對蝦對小鼠沒有影響，高劑量(12.2mg·kg-1)組染毒對蝦引起小鼠增重率下降，器官系數(shù)下降，中間粒細胞增加(p＜0.05)、輕度貧血、骨髓造血功能受影響;血清生化指標差異顯著(p＜0.05）以及遺傳特性出現(xiàn)明顯的損害效應(yīng)(p＜0.05），沒有

6、游離態(tài)T-2的染毒對蝦對小鼠有一定的損傷作用，間接證明對蝦體內(nèi)隱蔽態(tài)T-2的存在。
　　通過不同的高壓、不同濃度和pH的酸堿溶液和人工腸液、人工胃液將對蝦體內(nèi)的隱蔽態(tài)T-2解離，找出解離隱蔽態(tài)T-2的最佳方法，并通過MTT法和LC-MS/MS檢測T-2的含量來評價隱蔽態(tài)的解離效果。MTT試驗顯示，人工腸液是解離對蝦體內(nèi)隱蔽態(tài)T-2的最佳方法;經(jīng)過腸液水解蓄積毒性不同部位發(fā)現(xiàn)對蝦的頭、血液、肌肉和肝胰腺中都有隱蔽態(tài)T-2存在，并且不

7、同組織中隱蔽態(tài)T-2的含量隨T-2的暴露劑量增加而增加;12.2mg·kg-1血液中的含量最高(5.23ng·g-1)，其次到頭部和肌肉，而肝胰腺的只在最高劑量組有T-2解離出來，其濃度為0.17ng·g-1。
　　采用實時熒光定量PCR方法檢測游離態(tài)T-2和隱蔽態(tài)T-2作用RAW264.7細胞24h后，JAK/STAT信號通路中JAK1-3，STAT1-3，負反饋調(diào)節(jié)蛋白細胞因子信號抑制因子SOCS及炎性細胞因子IL-6、IL-