相思子毒素抗原、抗體制備及兩種免疫學(xué)檢測方法的建立.pdf

1、相思子毒素(abrin)，類似于蓖麻毒素(ricin)，是一種植物蛋白毒素，具有極強(qiáng)的細(xì)胞毒性作用，也是一種對(duì)公共安全存在潛在威脅的生物恐怖劑，因此，發(fā)展和建立特異、靈敏的檢測相思子毒素方法是十分急需、重要的。 本文經(jīng)對(duì)相思子毒素的傳統(tǒng)提取純化方法的優(yōu)化、改進(jìn)，建立了相思子毒素新的提純制備技術(shù)，獲取的天然毒素作為建立相應(yīng)檢測方法的參考物質(zhì)。利用大腸桿菌表達(dá)的重組相思子毒素A鏈蛋白制備了2種動(dòng)物來源的多克隆抗體，建立了基于膠體金免

2、疫層析、雙抗體夾心生物素-親和素ELISA的相思子毒素快速、特異和靈敏的檢測鑒定方法。 首先，根據(jù)相思子毒素對(duì)半乳糖的特異性結(jié)合能力，采用親和層析技術(shù)將相思子種子中大部分雜質(zhì)除去；由于在植物種子中蛋白毒素總是與凝集素并存，根據(jù)二者分子量的差異進(jìn)行了凝膠過濾層析，去除凝集素，最終獲得天然相思子毒素純品，電泳純度為98％。 然后，利用大腸桿菌表達(dá)重組相思了毒素A鏈蛋白，經(jīng)金屬螫合層析法純化后，將重組相思子毒素A鏈蛋白抗原免疫

3、大耳白兔、昆明小鼠，分別采集、純化兔血清多抗和鼠腹水多抗。接著利用兔抗重組相思子毒素A鏈和鼠抗重組相思子毒素A鏈多克隆抗體，結(jié)合標(biāo)記技術(shù)，分別建立基于雙抗體夾心法的膠體金免疫層析檢測卡和基于生物素-親和素ELISA的定量檢測相思子毒素方法。膠體金與ELISA法的檢測靈敏度分別達(dá)到600ng/mL、0.06ng/mL；線性范圍分別為：30ng/mL～600ng/mL、0.06ng/mL～60ng/mL回收率分別80％～110％，66.7％