基于絲裂霉素C-磷脂復(fù)合物的新型納米靶向載藥系統(tǒng)的構(gòu)建及性能評價.pdf

1、絲裂霉素C是一種臨床常用的廣譜抗生素類抗癌藥物。然而絲裂霉素C在靜脈注射給藥中受到諸多限制，如生物利用度極低、體內(nèi)半衰期極短、非特異性全身分布、嚴(yán)重毒副作用等，使其最終到達(dá)腫瘤部位的血藥濃度僅為靜脈給藥濃度的1/20左右。因此，如何最大限度地提高藥物療效以殺傷腫瘤細(xì)胞同時把藥物毒副作用降低到最低程度無疑是絲裂霉素C在癌癥化學(xué)治療中的重要問題。本研究立足于自組裝技術(shù)，我們設(shè)計并開發(fā)了基于絲裂霉素C-磷脂復(fù)合物的單藥納米傳遞系統(tǒng)以及基于絲裂

2、霉素C（主藥）-磷脂復(fù)合物和甲氨蝶呤前藥（副藥）的雙藥納米傳遞系統(tǒng)，并對這些體系的自組裝構(gòu)筑行為、藥物穩(wěn)定性能、藥物負(fù)載能力、藥物釋放和藥代動力學(xué)行為、體內(nèi)外藥效學(xué)進(jìn)行了系統(tǒng)的研究。本文主要探討了以下幾方面的內(nèi)容:
　　制備了絲裂霉素C-磷脂復(fù)合物，由此絲裂霉素C-磷脂復(fù)合物自組裝形成納米?？梢宰鳛榻z裂霉素C的納米藥物載體。我們使用核磁共振氫譜(1H NMR)、差式掃描量熱分析(DSC)、X-射線衍射分析(XRD)、傅里葉變換紅外

3、光譜(FTIR)、透射電子顯微鏡(TEM)、高效液相色譜分析（HPLC）等分析手段證明了絲裂霉素C與磷脂之間的有效復(fù)合，研究發(fā)現(xiàn)兩者之間相互作用以靜電作用和氫鍵等為主。通過單因素考察和正交實驗優(yōu)化設(shè)計研究，絲裂霉素C-磷脂復(fù)合物的復(fù)合率高達(dá)95.6％。另外，使用動態(tài)光散射(DLS)、電泳光散射(SLS)、掃描電子顯微鏡(SEM)、透射電子顯微鏡(TEM)、原子力顯微鏡(AFM)等考察負(fù)載絲裂霉素C-磷脂復(fù)合物的自組裝納米粒的理化性質(zhì)。絲

4、裂霉素C-磷脂復(fù)合物自組裝納米粒表現(xiàn)為類似脂質(zhì)體的囊泡結(jié)構(gòu)，該結(jié)構(gòu)完整、近似球形、水化動力學(xué)直徑大小為210nm、表面電勢為-33mV、藥物包封率為92％、載藥量為24％，其體外藥物釋放分為突釋和緩釋兩階段。絲裂霉素C-磷脂復(fù)合物自組裝納米粒相比于負(fù)載絲裂霉素C的脂質(zhì)體傳統(tǒng)劑型（載藥量7％）而言，藥物負(fù)載能力顯著提高。
　　為進(jìn)一步智能型控制藥物釋放、降低藥物突釋以及改善藥物靶向性，我們以絲裂霉素C-磷脂復(fù)合物為基礎(chǔ)，使用反膠束-

5、乳化-溶劑揮發(fā)法，利用親疏水作用力驅(qū)動自組裝可控構(gòu)筑了基于絲裂霉素C-磷脂復(fù)合物、葉酸功能化、雙重控制藥物釋放的聚合物-磷脂雜化納米粒，這種藥物傳遞系統(tǒng)的優(yōu)勢是可以降低血液循環(huán)中過早藥物泄漏和突釋（降低藥物非特異性釋放）和增加腫瘤細(xì)胞內(nèi)的緩/控釋（增加藥物特異性釋放）?；诮z裂霉素C-磷脂復(fù)合物的葉酸功能化聚合物-磷脂雜化納米粒相比于絲裂霉素C以及基于絲裂霉素C-磷脂復(fù)合物的聚合物-磷脂雜化納米粒而言，宮頸癌細(xì)胞中的細(xì)胞攝取和細(xì)胞毒性均

6、顯著增強(qiáng)，大鼠中的血液清除速度顯著降低、生物利用度顯著增加，荷瘤小鼠中的腫瘤累積程度顯著增加、抑瘤效果顯著改善、同時減輕全身毒性。
　　以負(fù)載絲裂霉素C-磷脂復(fù)合物的聚合物-磷脂雜化納米粒體系為基礎(chǔ)，我們進(jìn)一步合成了二硬脂?；字Ｒ掖及?聚乙二醇-甲氨蝶呤(DSPE-PEG-甲氨蝶呤)，并使用1HNMR、紫外-可見光吸收光譜（UV-vis）、FTIR、基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜（MALDI-TOF-MS）、HPLC證明了D

7、SPE-PEG-甲氨蝶呤的成功共軛，再以DSPE-PEG-甲氨蝶呤和絲裂霉素C-磷脂復(fù)合物為自組裝基元構(gòu)筑了新型自我靶向、負(fù)載絲裂霉素C（主藥，以絲裂霉素C-磷脂復(fù)合物劑型參與）和甲氨蝶呤（副藥，DSPE-PEG-甲氨蝶呤劑型參與）雙重藥物、多藥協(xié)同治療的聚合物-磷脂雜化納米藥物傳遞系統(tǒng)。DSPE-PEG-甲氨蝶呤的靶向和抗癌雙重作用對納米藥物傳遞系統(tǒng)的多功能化協(xié)同高度簡化起到關(guān)鍵作用。該系統(tǒng)的又一優(yōu)勢是絲裂霉素C和甲氨蝶呤可以協(xié)調(diào)充分

8、發(fā)揮“早期”（血液循環(huán)、腫瘤微環(huán)境中）靶向作用和“晚期”（腫瘤細(xì)胞內(nèi)）協(xié)同抗癌作用。基于絲裂霉素C-磷脂復(fù)合物的負(fù)載雙重藥物自我靶向聚合物-磷脂雜化納米粒相比于絲裂霉素C單一藥物、絲裂霉素C和甲氨蝶呤雙重藥物、基于絲裂霉素C-磷脂復(fù)合物的負(fù)載單一藥物聚合物-磷脂雜化納米粒而言，宮頸癌細(xì)胞中的細(xì)胞攝取和細(xì)胞毒性顯著增大，實現(xiàn)細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)雙重位點特異性運輸以及協(xié)同毒性效應(yīng);大鼠中的血液清除速度顯著降低、體內(nèi)半衰期顯著延長;荷瘤裸鼠中的腫瘤