松塔多糖和黨參復方多糖顆粒劑的分析、制備及其抗氧化活性研究.pdf

1、現(xiàn)有研究表明，體內(nèi)脂質(zhì)過氧化是導致機體衰老，以及腫瘤、心腦血管等諸多疾病的重要原因之一，植物多糖的抗氧化活性常與抗腫瘤活性有一定關(guān)聯(lián)，并與許多疾病的防治相關(guān)，因此，天然多糖抗氧化劑的篩選日益引起人們的更多關(guān)注。
　　本課題以天然多糖為研究對象，分別進行了多糖和多糖制劑的分析方法研究，以及松塔多糖和黨參復方多糖的提取分離與抗氧化活性研究、黨參復方多糖顆粒劑的制備和抗氧化活性研究等系列工作，主要內(nèi)容如下:
　　1、對多糖含量測定

2、方法--3，5-二硝基水楊酸比色法（DNS比色法）做出了重要改進，收到多重良好效果，具有很好的實用性。
　　DNS法屬于多糖含量測定常用方法之一，具有許多突出優(yōu)點，在計算多糖含量時，該法需要以水解后的多糖樣品顯色液測定值減去水解前的樣品顯色液測定值，這種計算差值的方法在計算多糖含量的同時，還兼有去除雜質(zhì)干擾的優(yōu)點，其主要不足是增加了差值計算和相應(yīng)測定步驟。在本實驗所建立的新方法中以水解前的樣品顯色液，取代原用的比色測定用空白液，因

3、而不必再進行樣品液水解前、后測定值的差值計算，同時也省略了相應(yīng)的多步操作。與原方法相比，多糖含量測定結(jié)果基本一致，方法學考察各項指標均符合規(guī)定。改進后的DNS法既能簡化計算與操作，又能避免空白溶液選用不當所導致的顯色劑吸收干擾，具有多重良好效果。該方法可用于紅松松塔多糖的含量測定，對其它多糖的含量測定也可提供參考。
　　2、建立了黨參復方多糖顆粒劑中多糖含量測定的新方法--淀粉酶法聯(lián)合DNS改進法進行測定，有效克服了輔料淀粉干擾有

4、效成分多糖含量測定這一技術(shù)難點，文獻中尚未見有同類工作報道。
　　在應(yīng)用上述DNS改進法對黨參復方多糖顆粒劑的有效成分多糖進行含量測定時曾遇到困難，因所用輔料淀粉也為多糖成分，導致DNS改進法測定結(jié)果實際反應(yīng)的是總多糖含量，即有效成分多糖和輔料淀粉含量之和，文獻中未見相應(yīng)解決辦法。本實驗中嘗試了下述思路:首先采用淀粉酶法除去顆粒劑中的輔料淀粉，將淀粉酶解為小分子雙糖后，再利用雙糖和多糖的醇溶性差異，以醇沉法分離出有效成分多糖，此后

5、即可使用DNS改進法對該多糖進行含量測定，避免淀粉的干擾;實驗結(jié)果表明，所建立的淀粉酶法和DNS改進法聯(lián)合測定黨參復方多糖顆粒劑多糖含量的方法，成功克服了輔料淀粉對有效成分多糖含量測定的干擾，方法學考察各項指標均符合規(guī)定，該方法可用于黨參復方多糖顆粒劑多糖含量測定，對于含有輔料淀粉的其它中藥制劑的多糖含量測定也可提供參考。
　　3、制備不同分子量的紅松松塔多糖，并進行體外抗氧化活性研究，對多糖純化程度與其活性的相關(guān)性進行初步探索。

6、
　　實驗中采用膜分離工藝制備不同分子量的紅松松塔多糖，并對各組分進行脫蛋白純化處理。測定各多糖產(chǎn)物的還原能力、清除DPPH·自由基能力。實驗結(jié)果表明，不同分子量的松塔粗多糖均具有體外抗氧化活性，呈現(xiàn)還原能力和清除DPPH·自由基活性，多糖濃度與其活性呈正相關(guān)，各粗多糖樣品脫蛋白后抗氧化活性均有降低。該實驗結(jié)果提示，當制備活性多糖時，不應(yīng)盲目進行脫蛋白處理，有必要佐以相應(yīng)的活性實驗提供參考。
　　4、在以上單一植物多糖活性研

7、究的基礎(chǔ)上，又進行了中藥復方多糖的活性研究，對不同方法制備的黨參復方總多糖的抗氧化活性進行測定，并對純化程度與其活性的相關(guān)性進行探索。
　　采用膜分離工藝制備黨參復方總多糖，并對得到的總多糖進行脫蛋白、脫色等不同方法的純化，測定各多糖產(chǎn)物的還原能力、清除羥基自由基、DPPH·自由基及超氧陰離子自由基的能力。相關(guān)結(jié)果表明黨參復方總多糖呈現(xiàn)明顯的體外抗氧化活性，多糖活性隨其濃度增大而增強，總多糖經(jīng)脫蛋白、脫色等純化步驟后體外抗氧化活性

8、減弱。該實驗結(jié)果提示，黨參復方總多糖具有較好的體外抗氧化活性，同時還進一步驗證了上述實驗結(jié)論，在活性多糖制備工藝設(shè)計中不應(yīng)盲目純化，不應(yīng)輕易確定是否脫蛋白、脫色，有必要伴隨相應(yīng)的活性實驗。
　　5、將上述黨參復方總多糖分離為不同分子量的多糖，分別進行體外抗氧化活性測定。
　　實驗中采用超濾技術(shù)制備不同分子量的黨參復方多糖，測定各多糖產(chǎn)物的還原能力、清除羥基自由基、DPPH·自由基及超氧陰離子自由基能力。實驗結(jié)果表明，不同分子

9、量的黨參復方多糖樣品均呈現(xiàn)體外抗氧化活性，并且具有良好的量效關(guān)系，黨參復方多糖的抗氧化活性隨其分子量的增大而增強。
　　6、對黨參復方多糖顆粒劑的制劑工藝、質(zhì)量檢查以及顆粒劑的抗氧化活性進行研究。
　　在制劑工藝研究中，通過比較試驗，優(yōu)選出顆粒劑的輔料種類及原料和輔料的配比，以稀乙醇為潤濕劑進行制粒，干燥，整粒，即得黨參復方多糖顆粒劑。體外抗氧化研究結(jié)果表明，黨參復方多糖顆粒劑具有較好的抗氧化活性，具有還原能力、清除羥基自由

10、基、DPPH·自由基及超氧陰離子自由基能力，樣品的多糖濃度與其活性呈正相關(guān)。由此可知，黨參復方多糖在制成顆粒劑后仍具有較好的體外抗氧化活性，該實驗結(jié)果可為黨參復方多糖制劑的后續(xù)研發(fā)提供參考依據(jù)。
　　本課題中建立了兩種新的分析方法，進行了松塔多糖和黨參復方多糖的制備與分離，研究了紅松松塔多糖的抗氧化活性，以及黨參復方多糖及其制劑的抗氧化活性，以上系列研究取得了有意義的進展，文獻中尚未見有相同工作報道。由上述實驗結(jié)果可知，來自廢棄資