rHuEPO預處理對HK-2細胞缺血再灌注損傷中PI3K-Akt-GSK-3β通路的調(diào)控作用.pdf

1、目的：探討PI3K/Akt/GSK-3β通路對人腎小管上皮細胞（HK-2）缺血再灌注損傷過程中細胞凋亡的調(diào)控及重組人紅細胞生成素（rHuEPO）的預保護作用。
　　 方法：正常培養(yǎng)的HK-2細胞，分為7組，正常對照組、缺血再灌注（I/R）組、LY294002干預組(PI3K/Akt阻斷劑、10 umol/L)、Licl干預組(GSK-3β阻斷劑、20 umol/L)、rHuEPO干預組(20 U/L)、rHuEPO+LY2940

2、02雙干預組、HuEPO +Licl雙干預組。RT-PCR及Western印跡法檢測蛋白激酶B(Akt)、糖原合成酶激酶3β（GSK-3β）及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶Caspase-3基因水平及蛋白活性水平；MTT法檢測細胞活力；AnnexinV/PI染色結合流式細胞儀技術檢測細胞凋亡。
　　 結果：缺血再灌注損傷誘導HK-2細胞凋亡率上調(diào)（15.2±1.43％）、Akt活性水平下降、GSK-3β活性水平上調(diào)、Caspase-3m

3、RNA及蛋白活性水平上調(diào)，與正常對照組相比，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），而Akt、GSK-3βmRNA水平基本不變(P＞0.05)。與I/R組相比，LY294002干預使細胞凋亡率進一步上調(diào)（18.2±2.06％）、Akt活性水平下調(diào)、GSK-3β活性上調(diào)，Caspase-3mRNA及蛋白活性上調(diào)，Licl干預使細胞凋亡率下調(diào)（12.3±0.85％）、Akt活性水平上調(diào)、GSK-3β活性下調(diào)，Caspase-3mRNA及蛋白活性下

4、調(diào)，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。rHuEPO干預與I/R組相比，細胞凋亡率下降（11.1±1.62％）、Akt活性水平升高而GSK-3β活性下調(diào)，Caspase-3mRNA及蛋白活性下調(diào)，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。與rHuEPO干預相比，rHuEPO+LY294002雙干預細胞凋亡率升高（13.4±1.94％）、Akt活性水平下降而GSK-3β活性上調(diào)，Caspase-3mRNA及蛋白活性上調(diào)，rHuEPO+Licl雙干

5、預細胞凋亡率下調(diào)（7.5±1.31％）、Akt活性水平上升而GSK-3β活性下降，Caspase-3mRNA及蛋白活性下降，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　 結論：1.缺血再灌注損傷可引起腎小管上皮細胞凋亡，Akt活性降低及GSK-3β活性升高影響Caspase-3依賴的外源性凋亡途徑可能是其凋亡機制之一。2.rHuEPO可通過增強Akt活性，降低GSK-3β及Caspase-3酶活性，從而減輕細胞凋亡，對HK-2缺血