耐多菌清真菌殺蟲劑的研制——耐藥性萊氏野村菌的誘變育種.pdf

1、化學(xué)農(nóng)藥防治害蟲盡管有很多優(yōu)點(diǎn)，但是大量使用化學(xué)農(nóng)藥后引發(fā)一系列的安全問題，因此可克服這些問題的防治方法—生物防治得到了更多研究者的關(guān)注。生物防治的方法有很多種，但是并不是每一種都適用于害蟲防治中，昆蟲病原真菌殺蟲劑有很多優(yōu)點(diǎn)，比如，主動(dòng)感染寄主并且具有致死作用；循環(huán)侵染是其他微生物殺蟲劑所沒有的一個(gè)特點(diǎn)；一般情況寄主不會產(chǎn)生抗性；因此國內(nèi)外都集中研究昆蟲病原真菌殺蟲劑。萊氏野村菌(Nomuraea rileyi，簡稱Nr，又稱為萊氏蛾

2、霉)，在世界各地均有分布，是昆蟲的重要病原真菌。該菌殺蟲毒力強(qiáng)，寄主范圍廣，能寄生30多種鱗翅目害蟲，特別是對鱗翅目夜蛾科類的昆蟲有著非常強(qiáng)的致病力，能在多種農(nóng)業(yè)系統(tǒng)中引發(fā)流行病，并且針對性非常強(qiáng)，對人體、其他非目標(biāo)昆蟲包括寄生蟲還有捕食者無毒害作用。多抗霉素是一種廣譜性抗生素類殺菌劑，這種殺菌劑因其內(nèi)吸傳導(dǎo)特性和水溶特性，對作物的抗病效果良好，對環(huán)境影響卻很小，因此被廣泛使用。
　　目前，國內(nèi)外有關(guān)萊氏野村菌對抗生素類殺菌劑的敏

3、感性還沒有系統(tǒng)詳細(xì)的報(bào)道，且很少有報(bào)道使用耐藥性萊氏野村菌進(jìn)行生物防治害蟲。因此研究萊氏野村菌對抗生素的敏感性，并運(yùn)用各種脅迫方法產(chǎn)生耐藥性萊氏野村菌菌株，對于生物防治具有重要意義。本研究通過對10株萊氏野村菌菌株的室內(nèi)毒力測定， 篩選出對斜紋夜蛾具有高毒力的菌株，并對高毒力菌株進(jìn)行紫外誘變和含多抗霉素平板的脅迫，篩選出耐多抗霉素的萊氏野村菌菌株。為萊氏野村菌和多抗霉素復(fù)配制劑研究提供依據(jù)。主要研究結(jié)果如下：
　　1.本

4、研究通過使用10株供試萊氏野村菌菌株對斜紋夜蛾3齡幼蟲致病毒力進(jìn)行測定，萊氏野村菌侵染后的僵蟲先為白色，然后變?yōu)樯罹G色。感染致死初期，幼蟲身體發(fā)僵、挺直或扭曲，發(fā)病后期幼蟲出現(xiàn)吐水、下痢等癥狀。結(jié)果表明不同菌株的致病力存在差異，綜合比較僵蟲率、校正死亡率以及致死中時(shí)間（LT50），其中以Nr19菌株的致病力最強(qiáng)，校正死亡率及僵蟲率分別為100％和86.6%，致死中時(shí)間LT50為5.0501d；Nr16和Nr41緊跟其后，校正死亡率分別為

5、100%和93.2%，僵蟲率分別為80.0%和85.7%，致死中時(shí)間LT50分別為3.9436d和4.2130d。以Nr16、Nr19、Nr41用于后續(xù)試驗(yàn)。
　　2.以篩選到的Nr16、Nr19、Nr41菌株為研究對象，根據(jù)對菌株適合致死率75%-85%，確定紫外誘變條件為:在孢子濃度為1x107個(gè)/mL時(shí)，采用30W紫外燈，照射距離為30cm時(shí)，Nr16、Nr19、Nr41照射時(shí)間分別為2.5min、4.0min、3.5min

6、。
　　采用菌絲生長抑制率法測定了紫外誘變后的萊氏野村菌對多抗霉素的敏感性。發(fā)現(xiàn)不同誘變菌株萊氏野村菌對多抗霉素的敏感性存在一定的差異。誘變菌株Nr4101的EC50值最大，誘變株Nr1601的EC50值最小，分別為1.0540mg/mL和0.4377mg/mL。
　　3.根據(jù)多抗霉素在田間的施用濃度是1.67-2.50mg/mL。結(jié)合紫外誘變菌株的最小抑菌濃度。在含多抗霉素平板上，通過涂分生孢子法定向篩選萊氏野村菌耐多抗霉