CD200-CD200R抑制性軸調控的巨噬細胞免疫下調對重癥胰腺炎治療作用的研究.pdf

1、目的：
　　重癥急性胰腺炎(Severe Acute Pancreatitis，SAP)是臨床上常見的危重疾病。常從普通胰腺炎發(fā)展而來，累及胰腺外遠隔器官，發(fā)生多器官衰竭，死亡率高達15％-20％。迄今為止，尚無對其主動預防、控制的有效途徑。在SAP發(fā)生發(fā)展的病理過程中，以巨噬細胞為核心的炎癥在局部級聯(lián)放大，炎癥介質通過血液循環(huán)向全身擴散，激活遠隔器官中的巨噬細胞，引發(fā)新一輪炎癥擴大。該過程中細胞因子過度釋放、大量炎癥介質不斷產生

2、、各種酶類失控活化損傷自身組織，最終造成遠隔重要器官如肺臟、肝臟等損傷，成為SAP的核心病理特征。如何及時下調免疫反應，避免炎癥失控成為防治SAP的關鍵。巨噬細胞可塑性極強，它不僅能夠啟動免疫反應，引起炎癥的爆發(fā)，也能夠下調免疫反應，引導炎癥平息。CD200/CD200R抑制性調控軸是髓樣細胞系統(tǒng)調控免疫反應的重要途徑，雖至今其作用機制未明，但以往的多項研究均證實了外周單核細胞中CD200/CD200R抑制性軸的異常與慢性中樞神經(jīng)變性密

3、切相關，且該調控軸在慢性炎癥和急性變態(tài)反應中對炎癥的顯著控制作用已經(jīng)被多項研究證實。本課題力圖借助CD200/CD200R抑制性調控軸對巨噬細胞的免疫調控作用，探討其在SAP發(fā)生發(fā)展過程中的具體作用和變化規(guī)律，利用CD200/CD200R調控軸進行干預并考察其對SAP形成的影響，為防治SAP尋找新靶點。
　　方法：
　　選取體重在20-25g之間的雄性C57bl/6小鼠隨機分為3組，單純重癥胰腺炎模型組，CD200-Ig處理

4、的模型組，CD200R-Ig處理的模型組。重癥急性胰腺炎模型制作：雨蛙素(Cerulein)50ug/kg腹腔注射，每小時一次，共注射7次，于最后一次注射雨蛙素時聯(lián)合注射脂多糖(LPS)10mg/kg。于最后一次注射后的不用時間點，隨機處死小鼠，時間點分別為注射前0h，注射后(30min，3h，12h，24h和72h)。第一部分：提取腹腔巨噬細胞，利用流式細胞檢測技術檢測CD200R在不同階段腹腔巨噬細胞上表達量的變化同時為實驗提供基礎

5、;第二部分：巨噬細胞分類轉化的檢測：分解提取的巨噬細胞用以①檢測炎癥因子IL-10，IFN-γ，IL-4，IL-12，TNF-α，TGF-β1在不同的處理因素及不同時間點上的表達量;②分解巨噬細胞提取行real time RT-PCR檢測NOS2，Arg-1，sphk-1，retnla在巨噬細胞內的表達量。根據(jù)上述巨噬細胞不同類型對于上述相關因子表達量的差異，分析巨噬細胞的分型;第三部分：提取小鼠各個時間點上的全身各器官，ELISE檢測

6、炎癥相關因子IL-10，IFN-γ，IL-4，IL-12，TNF-α，TGF-β1在不同的處理因素及不同時間點上的表達量，胰腺HE染色，以及血清淀粉酶在不同組別和時間點上的濃度，通過以上數(shù)據(jù)評估經(jīng)過CD200/CD200R抑制性軸的調控造成的巨噬細胞分型的改變，如何對重癥急性胰腺炎小鼠全身炎癥反應造成的影響。小鼠致死率在三組中的統(tǒng)計，對比疾病的不同階段小鼠機體各器官受累程度的變化，以及干預后出現(xiàn)的改變。
　　結果：
　　CD

7、200/CD200R-Ig的處理在炎癥相關因子的表達上表現(xiàn)出復雜的干預效果：根據(jù)實驗結果，CD200/CD200R抑制性軸的激活在誘導巨噬細胞轉化上起到了顯著的作用，從總體上降低了模型小鼠的致死率，表明CD200-Ig的干預處理確實對巨噬細胞分型及重癥急性胰腺炎的轉歸起到了良性的效應，總體上改善病程中小鼠的一般狀態(tài)，并降低了致死率。但具體到小鼠腹腔巨噬細胞及小鼠體內各臟器對于各個炎性因子的表達水平上，CD200/CD200R抑制性軸的激

8、活的作用表現(xiàn)出復雜的影響效應，并非單純抑制或促進，而是從總體上抑制了巨噬細胞分型向抑炎型細胞類型的轉變，同時在整體上提高了模型小鼠的致死率;而阻斷抑制性軸的作用也并非都與抑制軸激活組的結果相反，而是表現(xiàn)出復雜的效應。
　　結論：
　　CD200/CD200R抑制性軸的干預在調節(jié)巨噬細胞分型轉變中起到了重要的作用，對其作出的激活性處理有效的改善了重癥急性胰腺炎模型小鼠病情的轉歸，而對其作出的抑制性干預則起到了相反的效果，這些發(fā)