功能食品（含脂類與含蛋白類）輻照標(biāo)志物鑒定檢測(cè)技術(shù)研究.pdf

1、輻照技術(shù)是目前廣泛使用的一種保鮮殺菌技術(shù)，該項(xiàng)技術(shù)在食品行業(yè)發(fā)展良好，并逐漸商業(yè)化。雖然國內(nèi)外的研究學(xué)者針對(duì)輻照技術(shù)給予安全無危害的結(jié)論，但是仍規(guī)定某些特殊食品或特定食品不得進(jìn)行輻照處理（如嬰幼兒食品原料、功能食品等）。由于此項(xiàng)技術(shù)管理處于發(fā)展階段，市場(chǎng)上存在著非法輻照，過量輻照、無輻照標(biāo)示等一系列現(xiàn)象，不僅損害了消費(fèi)者的知情權(quán)和切身利益，更重要的是在國際貿(mào)易方面，由于非法輻照而被檢出退貨，嚴(yán)重限制或阻礙了我國的食品出口。為此，應(yīng)大力開

2、展輻照食品檢測(cè)與鑒定技術(shù)的研究，尤其針對(duì)于特殊食品等空白領(lǐng)域，制定相關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)法規(guī)與技術(shù)保障。
　　本研究針對(duì)脂類功能食品中輻照標(biāo)志物——2-烷基環(huán)丁酮（2-十二烷基環(huán)丁酮與2-十四烷基環(huán)丁酮）以及蛋白類功能食品中輻照標(biāo)志物——鄰酪氨酸與間酪氨酸進(jìn)行鑒定檢測(cè)技術(shù)研究，并研究了輻照技術(shù)對(duì)魚油品質(zhì)的影響，為脂類功能食品的輻照處理提供理論依據(jù)。
　　為了探索輻照魚油有效可靠的鑒定方法，建立了固相萃取-氣相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用法檢測(cè)輻照魚油

3、中輻解產(chǎn)物2-烷基環(huán)丁酮的方法。魚油用正己烷溶解，ProElut Silica固相萃取柱凈化，GC/MS檢測(cè)。結(jié)果表明，2-烷基環(huán)丁酮與其他雜峰得到良好的分離，在0.01~1.0 mg/L濃度范圍內(nèi)，峰面積與濃度呈良好線性，線性相關(guān)系數(shù)（R2）大于0.9990。在空白魚油中添加0.01、0.05和0.10 mg/kg水平的2-烷基環(huán)丁酮，平均加標(biāo)回收率為91.2％~96.0%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于6.0%（n=6），方法檢測(cè)限（LOQ）10

4、μg/kg。該方法測(cè)定不同輻照劑量下的魚油，表明輻照劑量與輻照魚油中2-烷基環(huán)丁酮含量存在線性相關(guān)關(guān)系，線性相關(guān)系數(shù)（R2）大于0.9990。
　　建立了氣相色譜/三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用（GC-QqQ-MS/MS）法同時(shí)檢測(cè)油脂類功能食品中輻照標(biāo)志物2-烷基環(huán)丁酮（2-ACBs）類化合物中2-十二烷基環(huán)丁酮（2-DCB）和2-十四烷基環(huán)丁酮（2-TCB）的方法。樣品用正己烷溶解，過ProElut Silica固相萃取柱凈化，GC-

5、QqQ-MS/MS測(cè)定。結(jié)果表明，2-DCB、2-TCB與基質(zhì)干擾峰得到良好的分離，在0.005~1.0 mg/L濃度范圍內(nèi)，峰面積與濃度呈良好線性，線性相關(guān)系數(shù)（R2）大于0.9990。在油脂類功能食品中添加0.01、0.05和0.10 mg/kg水平的2-DCB和2-TCB，平均加標(biāo)回收率為85.6%~97.1%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于7.0%（n=6），方法測(cè)定低限（LOQ）5μg/kg。應(yīng)用本方法于實(shí)際樣品分析，表明輻照劑量與輻照油脂

6、類功能食品中2-DCB和2-TCB含量存在線性相關(guān)關(guān)系,線性關(guān)系良好（R2>0.9956）。方法操作簡(jiǎn)便、耗時(shí)短、靈敏度高、穩(wěn)定性好，應(yīng)用于實(shí)際樣品的分析，針對(duì)油脂類功能食品是否經(jīng)過輻照給予定性鑒定和定量檢測(cè)，為輻照油脂類功能食品中輻照標(biāo)志物的檢測(cè)方法研究提供理論依據(jù)。
　　建立了液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用（LC-MS/MS）法同時(shí)檢測(cè)輻照蛋白類功能食品中鄰酪氨酸（o-tyrosine）和間酪氨酸（m-tyrosine）的分析方法。樣

7、品在氮?dú)猸h(huán)境下經(jīng)6 mol/L鹽酸酸解過夜，酸解液氮?dú)獯蹈桑? mL水復(fù)溶后，用Phenomenex Kinetex PFP色譜柱分離，以5 mmol/L乙酸銨溶液和甲醇為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫。質(zhì)譜采用電噴霧負(fù)離子（ESI-）模式電離，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）模式檢測(cè)，基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液外標(biāo)法定量。酪氨酸同分異構(gòu)體與基質(zhì)干擾峰得到良好的分離，在0.005~1.0 mg/L濃度范圍內(nèi)，峰面積與濃度呈良好線性，線性相關(guān)系數(shù)（R2）大于0.9990。

8、在乳清粉和乳清蛋白粉中添加3個(gè)水平的酪氨酸同分異構(gòu)體，平均加標(biāo)回收率為81.7%~98.2%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于8.0%（n=6），方法定量限（LOQ）和檢出限（LOD）分別為5.0μg/kg、8.0μg/kg和1.5μg/kg、2.4μg/kg。該方法應(yīng)用于實(shí)際樣品分析，表明輻照劑量與輻照蛋白類功能食品中o-tyrosine和m-tyrosine含量存在相關(guān)性，符合擬合多項(xiàng)式（R2>0.9850）。該方法針對(duì)蛋白類功能食品是否經(jīng)過輻照給

9、予定性鑒定和定量檢測(cè)，為輻照蛋白類功能食品中輻照標(biāo)志物的檢測(cè)方法研究提供理論依據(jù)。
　　本文對(duì)不同貯藏時(shí)間及不同輻照劑量（0.5 kGy~10.0 kGy）的魚油進(jìn)行酸價(jià)（AV）和過氧化值（POV）的測(cè)定，并利用乙酰氯-甲醇甲酯化-FID氣相色譜方法對(duì)輻照魚油軟膠囊中功效成分二十碳五烯酸（EPA）和二十二碳六烯酸（DHA）進(jìn)行含量測(cè)定與分析。結(jié)果表明，隨輻照劑量增大、貯藏時(shí)間增長，魚油的AV有不同程度的升高；POV升高到一定值后下

10、降；輻照劑量0.5~10.0 kGy范圍內(nèi)，EPA和DHA含量隨輻照劑量增大呈下降趨勢(shì)，存在一定相關(guān)性（符合擬合多項(xiàng)式：y=0.0659x2-1.5532x+98.35，R2=0.9999；y=0.05595x2-1.8656x+128.27，R2=0.9990）。
　　以本文建立的3種鑒定檢測(cè)方法，通過對(duì)脂類和蛋白類功能食品輻照標(biāo)志物的檢測(cè)與鑒定，能較為準(zhǔn)確地判定此類功能食品是否經(jīng)過輻照，有助于提升我國對(duì)食品安全的檢測(cè)技術(shù)水平，