腹瀉康治療脾虛泄瀉證的療效與作用機(jī)制研究.pdf

1、脾虛泄瀉證是一種以腹瀉、體重下降、畏寒、倦怠等為主要表現(xiàn)的中醫(yī)病證，病證范疇較廣，包括現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的慢性腹瀉、潰瘍性結(jié)腸炎、腸易激性綜合征、消化道腫瘤等多種疾病。由于尚缺乏治療效果較好的西藥，因此廣大醫(yī)學(xué)工作者把目光投注于在中醫(yī)理論指導(dǎo)下從多層次、多臟器治療疾病的傳統(tǒng)中醫(yī)藥。中藥復(fù)方腹瀉康經(jīng)過系統(tǒng)臨床觀察，具有健脾益氣、緩急止痛、澀腸止瀉等作用，臨床緩解治愈率達(dá)90％以上，具有較好的臨床推廣意義，值得深入研究。 脾虛泄瀉證病因和發(fā)病

2、機(jī)制復(fù)雜，較難制作出能全面反映與中醫(yī)證候密切相關(guān)的動(dòng)物模型來評(píng)價(jià)相關(guān)的治療藥物，對(duì)于該證動(dòng)物模型的研究迫在眉睫。本研究結(jié)合已有的文獻(xiàn)報(bào)道，制作和比較了多種大鼠脾虛泄瀉證模型，發(fā)現(xiàn)番瀉葉灌服加乙酸灌腸法制作的模型，其癥狀和各項(xiàng)客觀指標(biāo)的變化與該證中醫(yī)病證特點(diǎn)及現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的對(duì)應(yīng)疾病最為吻合，優(yōu)于其他模型。因此，可以在這種模型上進(jìn)行相關(guān)治療藥物的評(píng)價(jià)。 根據(jù)《中藥新藥研究指南》相關(guān)要求，應(yīng)用所建立的模型對(duì)腹瀉康進(jìn)行藥效學(xué)評(píng)價(jià)，發(fā)現(xiàn)腹瀉康

3、有一定的鎮(zhèn)痛作用，能延緩正常小鼠小腸推進(jìn)速度，改善大鼠模型的一般癥狀，保護(hù)腸黏膜，改善消化吸收和免疫功能，顯著降低MPO、NOS和iNOS的活性，降低NO的含量，減輕炎性細(xì)胞浸潤和氧自由基損傷等，對(duì)脾虛泄瀉證模型具有明顯的療效。 為進(jìn)一步研究腹瀉康治療脾虛泄瀉證的分子機(jī)理，本研究采用蛋白質(zhì)組學(xué)等相關(guān)技術(shù)探索腹瀉康分別作用于動(dòng)物模型前后的蛋白質(zhì)表達(dá)差異，尋找相關(guān)蛋白質(zhì)群。結(jié)果發(fā)現(xiàn)大鼠脾虛泄瀉證模型結(jié)腸組織中主要有5個(gè)蛋白表達(dá)上調(diào)，

4、5個(gè)蛋白表達(dá)下調(diào)，這些蛋白主要包括與過氧化反應(yīng)有關(guān)的Cu/Zn超氧化物歧化酶、DJ-1蛋白，與自身免疫有關(guān)的核內(nèi)不均一核糖核蛋白A2/B1、凝溶膠蛋白，與能量代謝有關(guān)的線粒體肌酸激酶、線粒體ATP合酶D鏈、電壓依賴性陰離子通道2，與細(xì)胞凋亡有關(guān)的肌動(dòng)蛋白，與異常增生有關(guān)的結(jié)蛋白，與凝血有關(guān)的血凝酶；脾臟組織中主要有9個(gè)蛋白表達(dá)下調(diào)，與泛素一蛋白酶體降解途徑有關(guān)的蛋白酶體α-2亞基，與細(xì)胞凋亡過程細(xì)胞骨架動(dòng)力學(xué)變化有關(guān)的鳥苷解離抑制蛋白α

5、、β、肌球蛋白Ⅱ輕鏈和原肌球蛋白α-1鏈，與細(xì)胞生長和分化有關(guān)的碳酸酐酶Ⅰ、Ⅱ和Ran蛋白。腹瀉康在不同程度上逆轉(zhuǎn)造模對(duì)大鼠結(jié)腸和脾臟蛋白質(zhì)表達(dá)的影響，提示可能通過抵抗氧化應(yīng)激反應(yīng)損傷、減輕自身免疫應(yīng)答、減少細(xì)胞凋亡、改善線粒體呼吸功能、調(diào)節(jié)泛素-蛋白酶體降解和細(xì)胞生長、分化等多條途徑發(fā)揮藥效。 本研究完成了脾虛泄瀉證動(dòng)物模型的篩選和建立，腹瀉康治療脾虛泄瀉證的療效評(píng)價(jià)，并用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行了初步探討，為進(jìn)一步深入