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1、多氧霉素與尼可霉素作為幾丁質(zhì)合成酶的特異性抑制劑,不僅具有廣譜的抗真菌活性,并且對(duì)動(dòng)植物毒性較低。這兩個(gè)抗生素的化學(xué)結(jié)構(gòu)較為相似,都是由一個(gè)或兩個(gè)獨(dú)立合成的肽基與一個(gè)核苷骨架在不同位置組裝而成。此外,這兩個(gè)抗生素的生物合成基因簇中相關(guān)基因同源性也較高?;诖?,我們?cè)O(shè)計(jì)了四個(gè)多氧霉素與尼可霉素的雜合抗生素。
本研究首先克隆了唐德鏈霉菌中尼可霉素的生物合成基因簇,并根據(jù)雜合抗生素的化學(xué)結(jié)構(gòu)需要,運(yùn)用PCR打靶技術(shù)對(duì)特定尼可霉素生物
2、合成基因進(jìn)行敲除,突變后的黏粒接合轉(zhuǎn)移入改造過的多氧霉素工業(yè)菌株中進(jìn)行異源表達(dá)。通過對(duì)抗生素產(chǎn)生菌的生物合成途徑進(jìn)行改造,得到若干重組菌株。
重組菌株的發(fā)酵產(chǎn)物純化后經(jīng)質(zhì)譜和核磁共振分析,確定得到了目標(biāo)的四個(gè)雜合肽核苷類抗生素(polyoxin N, nikkoxin B, nikkoxin C and nikkoxin D)的定向產(chǎn)生。本研究所產(chǎn)生的四個(gè)雜合抗生素對(duì)多數(shù)參與測(cè)試的人類或植物病原真菌具有良好的抑制作用。其中ni
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