紅霉素生物合成基因eryA啟動子的克隆與功能研究.pdf

1、eryA是直接控制著紅霉素母環(huán)6-脫氧-紅霉內(nèi)酯B合成的基因，在紅霉素生物合成過程中具有重要作用。本研究克隆了eryA基因的啟動子PeryA，以綠色熒光蛋白基因作為報告基因，構(gòu)建了一種大腸桿菌．糖多孢紅霉菌穿梭型質(zhì)粒。熒光顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)PeryA不但在糖多孢紅霉菌中起作用，而且在異源宿主變鉛青鏈霉菌中也具有功能。隨后，以變鉛青鏈霉菌為宿主，詳細研究了該啟動子作為鏈霉菌表達載體啟動子的特征，結(jié)果發(fā)現(xiàn)該啟動子的-35區(qū)并不是必需的，而且僅有

2、-10區(qū)、長度為41bp的該啟動子在鏈霉菌中仍可以表達外源基因。定點突變證明-10區(qū)對于該啟動子是不可缺少的。因此，41bp的該啟動子片段可作為鏈霉菌的有效啟動子，這是迄今為止所發(fā)現(xiàn)的最短的鏈霉菌啟動子之一，對構(gòu)建新的鏈霉菌表達載體將非常有用。 此外，我們對PeryA 啟動子附近的區(qū)域進行了初步分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)包括明eryA編碼基因前 300bp 的啟動子序列不能表達外源基因，其具體原因的闡明將為更深入探討紅霉素生物合成基因調(diào)控奠