銀杏酮酯-羥丙基-β環(huán)糊精包合物的工藝優(yōu)化、質量標準及藥代動力學實驗.pdf

1、背景:銀杏酮酯是國家衛(wèi)生部批準的二類新藥,其有效成分含量比傳統(tǒng)銀杏提取物有較大的提高,總黃酮含量達到44％,而黃酮類化合物主要有黃酮糖苷與苷元兩種存在形式,傳統(tǒng)銀杏提取物中5％的黃酮是以苷元形式存在的,而銀杏酮酯中45.45％以上的黃酮是以苷元形式存在的。大量研究顯示,黃酮苷元清除人體氧自由基的生物活性明顯優(yōu)于黃酮糖苷,黃酮苷元的效價是黃酮糖苷效價的7倍。但另一方面,黃酮類化合物的溶解度因結構及存在狀態(tài)(苷和苷元、單糖苷、雙糖苷和三糖苷

2、)不同而有很大差異。游離的黃酮苷元一般難溶或不溶于水,能溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙醚等有機溶劑。
　　 藥物溶解度是影響藥物釋放和吸收的重要因素。無論藥物以何種方式通過生物膜,它在吸收部位都必須以溶液狀態(tài)存在才能被吸收,所以藥物需要有一定的水溶性才能更好地產(chǎn)生藥理作用,同時為了能夠通過被動擴散透過生物膜,藥物也需要有一定的親脂性。
　　 一般來說,在不降低親脂性的前提下,通過處方手段來增加藥物的表觀溶解度,進而增加它們

3、透過生物膜的能力。常用的增溶技術包括:添加表面活性劑、調節(jié)PH值、減少粒徑、固體分散、微乳化、減少粒徑、脂質體或者上述手段的綜合應用等等。而與其他技術相比,包合技術能在人體耐受的PH值范圍內,在不降低藥物親脂性的前提下,有效地增加藥物的溶解度,并可以減少有機溶劑和表面活性劑的使用。
　　 環(huán)糊精類是最常用的包合載體,它們具有疏水性的空腔,能夠選擇性包合各種客體分子,從分子水平改變藥物的性質,形成穩(wěn)定的包合物,從而達到改善客體分子

4、的水溶性、穩(wěn)定性等目的。羥丙基-β-環(huán)糊精(HP-β-CD)水溶性極好,對腎無毒,對肌肉、粘膜幾乎無刺激作用。難溶性藥物以Hp-β-CD包合后,能顯著提高其穩(wěn)定性、溶解度和生物利用度。
　　 黃酮化合物類,如槲皮素、異鼠李素等,其抗氧化活性遠高于傳統(tǒng)的抗氧化物質如Vc、VE,而且銀杏提取物的抗氧化性與清除自由基的藥理作用之間呈現(xiàn)一定的相關性,因此保護其抗氧化性是實現(xiàn)其藥理作用的前提。而包合技術其中的一個優(yōu)點是,可以最大限度地保存

5、囊內物質的活性,減少外界不良因素的影響。
　　 本課題內容主要是HP-β—CD對GBE50進行包合研究,主要包括四個部分內容,具體包括:制備工藝優(yōu)化、質量標準制訂、藥代參數(shù)研究以及水溶性、穩(wěn)定性考察等。
　　 第一部分:工藝優(yōu)化與表征
　　 應用正交試驗設計,采用溶液攪拌法,以總黃酮醇苷包合率和載藥量為考察指標:以光學顯微鏡、紅外分光光度法(IR)、熱重分析法(TGA)鑒定包合物的形成。
　　 結果顯示:

6、最佳包合工藝為投料質量比為1:1,包合時間為4 h,包合溫度為30℃,按照最佳工藝制備出來的包合物總黃酮醇苷包合率82.3％,載藥量為11.55％。顯微鏡鑒別能夠從外觀層面區(qū)分包合物和物理混合物,紅外吸收光譜法能夠從基團角度顯示包合物的形成,而熱重分析法則從熱穩(wěn)定性方面的差異來證明包合物的生成。
　　 第二部分:質量標準
　　 采用薄層色譜法對銀杏酮酯進行定性鑒別；采用高效液相色譜法測定制劑中的總黃酮苷含量,色譜柱:Di

7、amonsil C18柱(250×4.6mm),流動相:甲醇-0.4％磷酸(45:55),檢測波長368nm,流速:1mL/min；采用紅外光譜分析法鑒別包合物。結果顯示:槲皮素在2～132μg·mL-1與峰面積具有良好的線性關系,R=0.9995；山柰素在0.9～60μg·mL-1與峰面積具有良好的線性關系,R=0.9998；異鼠李素在0.1～9μg·mL-1與峰面積具有良好線性,R=0.9998。槲皮素、山柰素、異鼠李素的平均回收率

8、分別為101.65％、100.43％、99.34％,RSD分別為1.25％,1.36％,0.63％。
　　 紅外光譜法鑒別包合物實驗中,可以從峰位和峰強兩方面著手進行考察,峰位能較好說明兩樣品的差異,而峰強僅從直觀層面分析。如果能對圖譜數(shù)據(jù)進行定量分析,將能獲得更加精密的鑒別結果。
　　 第三部分:藥代動力學實驗
　　 檢測方法的建立:加入等體積的25％鹽酸溶液,置于80℃中水解30min。待樣品冷卻后,加入2m

9、L乙酸乙酯,渦旋3min,離心后吸取上清層,氮氣吹干。殘渣用0.5mL甲醇充分溶解。以甲醇-0.4％磷酸(45:55)為流動相?；貧w方程分別為y=50086x-211.49(r=0.9951)、y=496326x-1551.3(r=0.9901)結果顯示:槲皮素在1.3～264.0μg·mL-1,山柰素在0.6～120μg·mL-1范圍內線性關系良好,本方法重現(xiàn)性好。
　　 藥代動力學研究:12只大鼠隨機均分為2組,分別灌胃銀杏

10、酮酯及其包合物后,檢測血漿藥物濃度。藥時曲線采用DAS藥代計算程序處理。實驗結果顯示:平均血藥濃度-時間曲線顯示:槲皮素有“雙峰”現(xiàn)象,山柰素存在“三峰”現(xiàn)象。以槲皮素計,包合物的相對生物利用度為146.10％；以山柰素計,包合物的相對生物利用度為346.15％。自制銀杏酮酯-羥丙基-β-環(huán)糊精包合物與銀杏酮酯相比,吸收顯著增加,除了提高溶解度外,其他促進吸收的機理還有待進一步研究確認。
　　 第四部分:水溶性和穩(wěn)定性考察

11、>　　 水溶性:取HP-β-環(huán)糊精適量,加水配制成濃度分別為0、2.5、5、7.5、10、12.5、15mmol/L的溶液,加入過量的GBE50。過濾后收集濾液,通過HPLC檢測各個濾液濃度,繪制相溶解曲線。結果顯示:運用包合技術,可以把銀杏酮酯中的總黃酮醇苷的溶解度提高4倍。結論:包合技術能有效提高銀杏酮酯中總黃酮醇苷在水中的溶解度。
　　 穩(wěn)定性:把參比銀杏酮酯和包合物放在90℃條件下,1、3、5、10d后采樣檢查保存率；

12、把參比銀杏酮酯和包合物放在強度為4000Lx光照下照射,1、3、5、10d后采樣檢查保存率；把參比銀杏酮酯和包合物放在92.5％和75％濕度條件下,按采集點后,采樣檢查重量變化率。結果顯示:在90℃條件下,加熱10d,銀杏酮酯的總黃酮醇苷保存率僅為78.0％,而包合物可達92.7％；在強度為4000Lx光照下照射10d,銀杏酮酯的總黃酮醇苷保存率僅為90.3％,而包合物可達96.3％,；但是在75％和92.5％濕度條件下,銀杏酮酯和包合