核糖核酸酶T2調(diào)節(jié)精子運(yùn)動(dòng)能力的相關(guān)研究.pdf

1、核糖核酸酶T2是廣泛表達(dá)在原核生物、真核生物上的一類底物非特異性核糖核酸內(nèi)切酶，它參與細(xì)胞核糖核酸分解、細(xì)胞免疫應(yīng)答、細(xì)胞增殖與運(yùn)動(dòng)等多種功能。此外，它還有腫瘤抑制作用，而這種抑制作用并不是基于它的核糖核酸酶活性，有研究發(fā)現(xiàn)核糖核酸酶 T2的家族成員ACTIBIND可以通過與血管生成素競爭性的結(jié)合腫瘤細(xì)胞中的肌動(dòng)蛋白，從而抑制細(xì)胞的生長與遷移。哺乳動(dòng)物的精子中表達(dá)有豐富的肌動(dòng)蛋白，并且主要表達(dá)在精子頭部、頸部和尾部鞭毛部位，其對(duì)精子運(yùn)動(dòng)

2、能力的產(chǎn)生具有重要的作用。因此我們?cè)O(shè)想核糖核酸酶T2在哺乳類精子，如小鼠和人精子上是否有表達(dá)？如有表達(dá)，情況如何？是否通過與肌動(dòng)蛋白相互作用從而影響精子的運(yùn)動(dòng)能力？如果是，那么體外加入純化的核糖核酸酶T2蛋白是否會(huì)影響精子的運(yùn)動(dòng)？
　　鑒于上述的推測，我們通過免疫熒光染色法和激光共聚焦顯微鏡分析檢測核糖核酸酶T2在雄性小鼠生殖器官表達(dá)、及其在精子上與肌動(dòng)蛋白的表達(dá)關(guān)系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)核糖核酸酶T2在雄性小鼠生殖系統(tǒng)主要定位在附睪頭部上皮

3、細(xì)胞、以及附睪、輸精管管腔和前列腺、精囊腺腺腔內(nèi)，并與肌動(dòng)蛋白共同表達(dá)在雄性小鼠精子的頂體部位、頸部以及尾部鞭毛區(qū)域，這說明表達(dá)在小鼠精子中的核糖核酸酶T2可能通過與肌動(dòng)蛋白作用，從而參與精子運(yùn)動(dòng)能力的調(diào)節(jié)作用。因此，根據(jù)上述研究結(jié)果，我們通過從黑曲霉菌的培養(yǎng)液中分離、純化出具有生物活性的核糖核酸酶T2，并將核糖核酸酶T2蛋白與小鼠附睪尾部的精子共孵育后，對(duì)小鼠精子的運(yùn)動(dòng)力及前向運(yùn)動(dòng)等指標(biāo)進(jìn)行檢測，結(jié)果證實(shí)核糖核酸酶 T2可以明顯抑制小

4、鼠精子運(yùn)動(dòng)力（p＜0.05）及前向運(yùn)動(dòng)（p＜0.05），且抑制效果具有時(shí)間及劑量依賴性。最后，我們通過免疫熒光技術(shù)對(duì)核糖核酸酶 T2在正常生育男性精子上的表達(dá)定位以及其與actin表達(dá)的共定位進(jìn)行了鑒定，發(fā)現(xiàn)核糖核酸酶T2表達(dá)在人精子的頂體部位、頸部以及尾部鞭毛部位，與actin具有部分相似定位，尤其是在與精子運(yùn)動(dòng)相關(guān)的尾部，并且從黑曲霉菌的培養(yǎng)液中分離、純化出具有生物活性的核糖核酸酶T2同樣可以明顯抑制人精子運(yùn)動(dòng)力、前向運(yùn)動(dòng)力并且抑制