miRNA對(duì)肺癌的調(diào)控和易感性研究.pdf

1、肺癌是常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，在我國(guó)其發(fā)病率和死亡率都居于首位，嚴(yán)重影響人類(lèi)健康和社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展。尋找有效的作用靶點(diǎn)和可靠的生物標(biāo)志物，為肺癌的預(yù)防、早期診斷和針對(duì)性治療提供依據(jù)，是亟待解決的重大公共衛(wèi)生問(wèn)題。mircoRNA是一類(lèi)高度保守的短鏈非編碼RNA，通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)的方式識(shí)別靶mRNA，調(diào)控基因表達(dá)，參與細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、周期、凋亡等多個(gè)生物學(xué)過(guò)程。既往研究表明miRNA與腫瘤關(guān)系密切，在腫瘤發(fā)生過(guò)程中起到類(lèi)似于癌基因或抑癌基因的作用

2、，但是目前尚有大量的miRNA生物學(xué)功能和調(diào)控機(jī)制不明確。miRNA SNP與腫瘤易感性的關(guān)系也逐漸引起人們的重視，當(dāng)SNP發(fā)生在miRNA上時(shí)，可能影響miRNA的生物學(xué)功能，進(jìn)而影響腫瘤的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。
　　本研究在生物信息學(xué)分析的基礎(chǔ)上，探討miR-202和miR-1908對(duì)肺癌細(xì)胞的生物學(xué)功能及靶基因調(diào)控作用，分析miR-202和miR-1908在肺癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的作用以及分子機(jī)制。另外，我們采用病例-對(duì)照研究，探究miR-

3、202rs12355840、miR-1908 rs174561、miR-608 rs4919510、miR-548jrs4822739的基因多態(tài)性與肺癌易感性的關(guān)系，并通過(guò)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)分析miR-202rs12355840、miR-1908 rs174561對(duì)mir-202和mir-1908表達(dá)量的影響。研究結(jié)果為肺癌的預(yù)防、早期診斷及治療提供生物標(biāo)志物和作用靶點(diǎn)。
　　一、miRNA對(duì)肺癌的調(diào)控研究
　　目的探討miR-202

4、和miR-1908對(duì)肺癌細(xì)胞A549的生物學(xué)功能和靶基因調(diào)控。
　　方法應(yīng)用DIANA-TOOLs及KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)miR-202和miR-1908進(jìn)行生物信息學(xué)分析，探討其可能參與的信號(hào)通路和潛在靶基因。通過(guò)慢病毒轉(zhuǎn)染，上調(diào)和下調(diào)A549細(xì)胞中miR-202和miR-1908的表達(dá)，應(yīng)用MTT和流式細(xì)胞技術(shù)分別檢測(cè)miR-202和miR-1908對(duì)A549細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期和凋亡的影響。應(yīng)用RT-qPCR和Western blo

5、t技術(shù)分別檢測(cè)miR-202和miR-1908對(duì)其預(yù)測(cè)靶基因PIK3CA和PP5的mRNA和蛋白表達(dá)水平的調(diào)控。
　　結(jié)果生物信息學(xué)分析顯示，miR-202參與的信號(hào)通路主要集中在Non-small celllung cancer等腫瘤相關(guān)通路，并可能通過(guò)對(duì)PIK3CA的靶向調(diào)控發(fā)揮其作用。miR-1908主要參與MAPK signaling pathway等相關(guān)通路的調(diào)控，PP5為其重要潛在靶基因。生物學(xué)功能研究表明，與陰性對(duì)照

6、組相比，上調(diào)miR-202的表達(dá)能夠抑制A549細(xì)胞增殖，引起細(xì)胞周期G1/S期阻滯，對(duì)細(xì)胞凋亡無(wú)明顯影響。上調(diào)的miR-1908的表達(dá)可引起細(xì)胞G2期阻滯，S期減少，對(duì)細(xì)胞增殖和凋亡無(wú)明顯影響。靶基因研究結(jié)果顯示，與陰性對(duì)照組相比，PIK3CA蛋白的表達(dá)量與miR-202呈負(fù)相關(guān)，但其mRNA的表達(dá)無(wú)顯著性改變。與陰性對(duì)照組相比，PP5蛋白的表達(dá)量與miR-1908呈正相關(guān)，其mRNA的表達(dá)也無(wú)顯著性改變。結(jié)論miR-202可能通過(guò)對(duì)

7、PIK3CA的負(fù)向調(diào)控影響A549細(xì)胞增殖和細(xì)胞周期，miR-1908可能通過(guò)對(duì)PP5的正向調(diào)控影響A549細(xì)胞周期。
　　二、miRNA基因多態(tài)性與肺癌易感性研究
　　目的探討miR-202、miR-1908、miR-608、miR-548j基因多態(tài)性對(duì)肺癌易感性的影響。
　　方法通過(guò)病例-對(duì)照研究，收集了223例肺癌病例和224例對(duì)照的流行病學(xué)資料和血樣，采用LDR法對(duì)miR-202 rs12355840、miR-

8、1908rs174561、miR-608rs4919510、miR-548j rs4822739的基因型分布進(jìn)行檢測(cè)，進(jìn)一步按病理類(lèi)型和吸煙情況進(jìn)行分層分析，探討miRNA SNP對(duì)肺癌易感性的影響。通過(guò)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染，應(yīng)用RT-qPCR技術(shù)分析miR-202和-miR-1908基因多態(tài)性對(duì)其miRNA表達(dá)的影響。
　　結(jié)果人群研究結(jié)果顯示，miR-202 rs12355840、miR-1908rs174561、miR-608rs491