基于全自動管式化學發(fā)光免疫檢測系統(tǒng)的人血清鐵蛋白定量檢測試劑的研制.pdf

1、缺鐵性貧血（irondeficiencyanemia，IDA）是由于各種不同的原因?qū)е麦w內(nèi)儲存鐵缺乏，影響細胞血紅素的生成而導致的貧血。缺鐵性貧血是世界范圍內(nèi)最常見的營養(yǎng)缺乏病之一，影響著約10億人口。
　　從缺鐵發(fā)展到缺鐵性貧血是一個緩慢的過程，一般經(jīng)歷鐵缺乏期（irondeplete，ID）、缺鐵性紅細胞生成期(irondeficiencyerythropoiesis，IDE)和缺鐵性貧血期。發(fā)生缺鐵和缺鐵性貧血不僅會影響身體

2、正常的機能，還可能導致胎兒和兒童的智力發(fā)育受到不可逆轉(zhuǎn)的影響。通常機體內(nèi)儲存鐵的量與血清鐵蛋白的水平成正相關，機體內(nèi)血清鐵蛋白的水平是評價機體儲存鐵缺乏和診斷缺鐵性貧血靈敏、特異的指標。血清鐵蛋白的檢測對盡早地發(fā)現(xiàn)缺鐵并預防缺鐵性貧血的發(fā)生具有重要意義。本研究制備了人鐵蛋白抗原和抗人鐵蛋白抗體，進而建立了適用于全自動管式化學發(fā)光免疫分析系統(tǒng)的人血清鐵蛋白化學發(fā)光免疫定量檢測試劑，試劑檢測性能與國際主流同類試劑相當。
　　本研究利用

3、大腸桿菌表達系統(tǒng)表達了人鐵蛋白H、L亞基(FTH1，F(xiàn)TL)，所表達的蛋白經(jīng)熱處理、凝膠過濾層析、陰離子交換層析等方法純化，獲得了純度較高的rhFTH1和rhFTL。經(jīng)過SDS-PAGE、分子篩層析和透射電鏡觀察等方法證實了純化的rhFTH1、rhFTL能在體外自組裝成與天然鐵蛋白類似的二十四聚體樣結(jié)構顆粒。
　　用原核表達的人鐵蛋白H、L亞基形成的顆粒抗原免疫小鼠，顯示rhFTL具有較好的免疫原性;以rhFTL和天然提取的人肝臟

4、鐵蛋白為篩選抗原進行單克隆抗體的篩選，最終獲得了22株鐵蛋白特異性的單克隆抗體。鑒定了其中16株IgG亞型的單克隆抗體的基本性質(zhì)，其中有12株抗體的效價達106以上。
　　對研究中篩選到的12株反應性較好的單克隆抗體進行抗體配對，以鐵蛋白標準品進行配對初篩、臨床標本進行配對復篩獲得了2個可用的抗體配對。根據(jù)配對抗體建立人血清鐵蛋白化學發(fā)光免疫定量檢測試劑，分析其檢測靈敏度、線性范圍及與對照試劑檢測血清標本的相關性，結(jié)果顯示建立的人