糖尿病創(chuàng)面與正常皮膚創(chuàng)面差異表達基因的篩選研究.pdf

1、目的:應用基因表達譜芯片對糖尿病大鼠創(chuàng)面與正常大鼠創(chuàng)面基因表達譜進行對比分析并篩選差異基因,初步探討糖尿病大鼠創(chuàng)面與正常大鼠創(chuàng)面基因表達的特征及其可能的生物學意義,為治療糖尿病創(chuàng)面提供新的思路和線索。
　　方法:將 SD雄性大鼠隨機分為糖尿病組和正常對照組。一次性腹腔注射鏈脲佐菌素(Streptozocin,STZ,),劑量為65 mg/kg,制備成糖尿病大鼠模型。給藥3周后抽取正常大鼠和穩(wěn)定成模的糖尿病大鼠,在背部制成直徑2.0

2、 cm的圓形全層皮膚缺損創(chuàng)面。72小時后取創(chuàng)面組織,TrizoI一步法提取組織總RNA,瓊脂糖甲醛變性凝膠電泳進行質檢。逆轉錄法將 cy3熒光標記到組織的cDNA上,制成探針后與表達譜芯片雜交,用Agilent G2565CA Microarray Scanner掃描,即得雜交圖片。隨后用Feature Extraction(v10.7)軟件分析雜交圖片并提取數(shù)據(jù)、博奧表達譜芯片 Analyzer軟件進行分析,把圖像信號轉化為數(shù)字信號,

3、以2倍差異表達值篩選出差異表達基因。選擇其中上調或下調明顯的基因,用實時 RT—PCR技術進一步驗證相關基因的可靠性。同時,對篩選出的差異表達基因進行基因功能分類。
　　結果:與正常大鼠創(chuàng)面組比較,糖尿病大鼠組創(chuàng)面差異表達基因2206個,其中上調基因785個、下調基因1421個,明顯上調基因231個,明顯下調基因463個,實時 RT—PCR驗證結果與芯片篩選結果一致。根據(jù)基因功能分類發(fā)現(xiàn)差異基因涉及糖代謝、蛋白質合成、離子通道、神